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標題抗污染護膚品如何體外評價?

   

提供者:廣東博溪生物科技有限公司    發(fā)布時間:2021/1/22   閱讀次數(shù):198次 >>進入該公司展臺
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隨著環(huán)境污染、尤其是空氣污染加重,皮膚作為最外層的屏障首當其沖。人們希望能夠通過美容護膚產(chǎn)品對皮膚起到一定的防護作用,抗污染化妝品就應(yīng)運而生。
本文將從污染物對皮膚的危害、化妝品抗污染方向及抗污染化妝品功效評價等三個方面來進行敘述。
01
污染物對皮膚的危害
根據(jù)污染源的不同,我們可以將污染物大致歸類為霧霾、重金屬、化學(xué)物質(zhì)、香煙、藍光和細菌等等,它們都會對皮膚產(chǎn)生一定的危害作用。我們以目前各個領(lǐng)域都在關(guān)注的“老大難”問題霧霾為例。

圖1   1992-2017年針對不同污染源的專利技術(shù)分布
(張溢等,抗污染化妝品專利分析,2019)
 
霧霾現(xiàn)在統(tǒng)指一種空氣污染狀態(tài),由特定氣候條件和人類活動作用產(chǎn)生的PM2.5被認為是霧霾天氣的元兇。PM(particulate matter)指顆粒物,數(shù)字代表粒徑,那么PM2.5即直徑小于等于2.5微米的顆粒物。與較粗的大氣顆粒物相比,PM2.5粒徑小,面積大,活性強,易附帶有毒、有害物質(zhì),因此更易對環(huán)境和人體產(chǎn)生不良影響。
 
02
PM2.5對皮膚的危害
受粒徑限制,PM2.5無法直接穿透肌膚,但它們易黏附于親脂性的皮膚表面,并不斷釋放其所吸附的有毒有害物質(zhì),這些小分子有害物質(zhì)可利用毛囊作為通道進入皮膚的更深層,破壞肌膚健康細胞,導(dǎo)致皮膚提前老化,并引發(fā)過敏、皮炎、色斑等肌膚問題。
總體來說,PM2.5對皮膚的危害主要體現(xiàn)在以下四個方面:
 
 
01  產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)
氧化應(yīng)激反應(yīng)即是自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種副作用,空氣污染物如PM2.5就能夠介導(dǎo)活性氧 ROS 的產(chǎn)生。自由基作用于脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA,引起膜脂質(zhì)過氧化、蛋白質(zhì)氧化或水解、誘導(dǎo)或抑制蛋白酶活性和DNA損傷,從而誘導(dǎo)細胞凋亡。
而與PM2.5相關(guān)的自由基主要有三個來源:
①顆粒物本身:PM中的自由基含量豐富并能存在較長時間,將含有自由基的PM作用于人細胞和噬菌體的DNA,可檢測到DNA損傷,可能與PM上的自由基有關(guān);
②顆粒物上所吸附的成分:如過渡金屬鐵和銅等,進入人體后可在局部釋放出濃度較高的轉(zhuǎn)運金屬離子,產(chǎn)生大量自由基。此外,由于PM2.5比表面積大,具有特殊的表面化學(xué)特征,亦能產(chǎn)生自由基,從而造成氧化損傷。研究發(fā)現(xiàn),如果使用金屬螯合劑和自由基清除劑進行預(yù)處理,顆粒物的損傷效應(yīng)能在很大程度上得到抑制;
③炎癥細胞:顆粒物的一些成分作為抗原,也可引起機體的免疫反應(yīng),在巨噬細胞吞噬過程中,消耗大量氧,使細胞外生成大量活性氧,從而使細胞內(nèi)氧化還原反應(yīng)失去平衡,在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量自由基。
 
02  破壞皮膚屏障
研究表明,PM2.5能夠影響到屏障、保濕相關(guān)的 Caspase14等和皮膚屏障功能以及皮膚結(jié)構(gòu)功能相關(guān)的基因表達,從而削弱皮膚的屏障功能,甚至導(dǎo)致肌膚日益敏感。相應(yīng)的,當皮膚屏障功能下降時,外界各類污染因素也更易引發(fā)肌膚敏感,并伴隨細紋、松弛、色斑等老化跡象。
并且長期空氣污染環(huán)境能夠增加敏感皮膚發(fā)生率,誘發(fā)皮膚濕疹甚至皮炎。生活在空氣污染嚴重環(huán)境下的人群皮膚紅斑指數(shù)、皮膚劃痕現(xiàn)象發(fā)生率和過敏性蕁麻疹發(fā)病率均顯著高于正常環(huán)境。有研究數(shù)據(jù)顯示,北京敏感皮膚比例已經(jīng)達到 17.12%,并且敏感皮膚呈現(xiàn)低齡化趨勢。
Kangmo Ahn等研究了空氣污染物與特應(yīng)性皮炎的關(guān)系,特應(yīng)性皮炎的發(fā)病與屏障功能受損密切相關(guān),而包括PM在內(nèi)的空氣污染物都可能通過破壞屏障從而引起特應(yīng)性皮炎。
圖2   暴露于空氣污染物影響AD發(fā)展的可能機制
(Ahn, Kangmo. The role of air pollutants in atopic dermatitis, 2014)
 
 
03  誘導(dǎo)炎癥級聯(lián)反應(yīng)
前面提到,顆粒物的一些成分可能作為抗原引起機體的免疫反應(yīng),已有研究發(fā)現(xiàn),暴露于空氣污染物能顯著上調(diào)角質(zhì)細胞中基因的表達,其中就包括細胞因子 IL - 6、IL - 8和細胞色素CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1等。細胞因子主要參與炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié),輕微的慢性炎癥就會造成肌膚的老化。
 
04  攜帶多環(huán)芳烴化合物
PM2.5顆粒上附著的,除了金屬鐵、銅之外還有一類非常重要的物質(zhì)——多環(huán)芳烴化合物(PAHs)。它可以誘發(fā)產(chǎn)生活性氧,進而氧化損傷DNA,激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,引起細胞突變。且PM2.5中所含的PAHs具有高度親脂性,容易進入皮膚。Magnani等把重建的人表皮模型暴露在PM中,發(fā)現(xiàn)PM能夠滲透進皮膚。
吸附于 PM2.5 上的 PAHs 進入皮膚后,能和芳香烴受體(AhR)結(jié)合形成毒性復(fù)合物PAH - AhR,它能穿透細胞核,并在細胞核內(nèi)誘導(dǎo)CYP1A1、金屬基質(zhì)蛋白酶MMP - 1、α- MSH的前體POMC以及炎癥因子Cytocines的表達,從而引發(fā)氧化應(yīng)激、膠原降解、色斑、炎癥等一系列肌膚問題干擾染色體的生理活動,制造出多種雜蛋白,引起皮膚癌、炎癥、過敏,它還能啟動與皮膚老化有關(guān)的基因表達,導(dǎo)致肌膚衰老。
 
圖3   AhR的作用機理
 
03
抗污染化妝品評價方法
由于PM2.5等空氣污染物會促使活性氧ROS的生成,能夠攜帶PAHs與AhR結(jié)合產(chǎn)生不良影響,引起炎癥反應(yīng),促進細胞凋亡,因此我們可以從以上四個環(huán)節(jié)對抗污染化妝品進行功效評價。
 
 
01  以香煙煙霧分析模型(CES)為誘導(dǎo)條件評價
以抽真空的方式讓香煙煙霧提取物穿過30 mL已消毒的磷酸鹽緩沖液,來制備香煙煙霧溶液(CSS)。試驗時將人類真皮成纖維原細胞(NHDF)或表皮角質(zhì)化細胞(NHEK)放入香煙煙霧溶液,或含有一定濃度活性物的香煙煙霧溶液中培養(yǎng)。測試結(jié)束后,可采用多種方法對活性物的抗污染機理進行研究。
劉珊等研究了維生素C對香煙煙霧氧化應(yīng)激作用的影響,發(fā)現(xiàn)CSS作用細胞DNA損傷增強, 而維生素C干預(yù)能顯著降低 DNA 損傷和ROS水平,增加抗氧化酶SOD的活性。
以測定DNA損傷水平為例:如下圖,利用彗星試驗檢測,通過對細胞彗星尾長的計算評估CSS和維生素C對細胞DNA的損傷或降低損傷作用。
圖4   VC 對 CSS作用細胞彗星尾長改變的影響
(劉珊等. 維生素C對香煙煙霧的氧化應(yīng)激作用的影響,2004,)
 
因此如果活性物或產(chǎn)品能夠抑制CSS的氧化應(yīng)激反應(yīng),則可以判定,活性物具有抗污染的功效。
 
02  以苯并芘(BaP)為誘導(dǎo)條件評價
苯并芘(BaP)是多環(huán)芳烴的代表性物質(zhì),它存在于汽車廢氣、香煙、廚房油煙等煙氣中。它會間接導(dǎo)致肌膚炎癥,加速肌膚老化,還會造成無法修復(fù)的DNA損傷。因此,可逆地阻止BaP與AhR的結(jié)合是抗污染的一條有效途徑。
以苯并芘為誘導(dǎo)條件時,我們可以通過測定ROS含量、炎癥因子含量、線粒體膜電位變化和AhR相關(guān)基因變化來評價抗污染化妝品或活性物的功效。
基于角質(zhì)形成細胞的功效評價
 
以測定AhR相關(guān)基因變化為例:
為了證明活性物的上述功效,可將角質(zhì)形成細胞分為三組,試驗組用一定濃度活性物培養(yǎng),對照組不作處理,然后用BaP溶液處理兩組細胞,采用qRT - PCR或RNA-seq測量AhR基因表達量,通過對比其表達的降低程度,評價產(chǎn)品或活性物對BaP的解毒功效。
基于3D表皮模型的功效評價
 
我們同樣也可以利用3D表皮模型來進行評價:
用BaP連續(xù)刺激后,連續(xù)使用活性物進行處理,通過檢測其組織活力、觀察其組織形態(tài)等指標,來評價產(chǎn)品或活性物的抗污染功效。
如下圖,為對照組與經(jīng)過BaP處理之后的組織H&E染色,可以清楚看出,相較于對照組,用BaP處理后的表皮模型角質(zhì)層明顯增厚,基底層細胞不再呈柱狀分布,即說明,BaP對皮膚組織有較強的損傷作用。
圖5   基于3D表皮模型評價抗污染功效(博溪生物)

將產(chǎn)品或活性物涂抹在表皮模型后,對同樣的指標進行測試和觀察,若與BaP損傷后的模型相比有明顯的改善,則可說明產(chǎn)品或活性物具有抗污染的功效。
圖6   產(chǎn)品/活性物給藥(博溪生物)
 
 
如何評估化妝品的抗污染功效就介紹到這里,若有疑問或相關(guān)業(yè)務(wù)請聯(lián)系小助手。

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參考文獻
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