蜂膠是由蜜蜂，特別是工蜂，從植物的樹膠、樹脂中采集，并與上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成 的具有黏性的固體膠狀物。現(xiàn)代研究結(jié)果表明，蜂膠含有維生素、酚類、蓓烯類、黃酮類化合物等多種營(yíng)養(yǎng)保健成分。在蜂膠的眾多活性物質(zhì)中，黃酮類物質(zhì)是為關(guān)鍵的成分之一，它具有抗菌、殺毒、 消炎止痛、降血脂、促進(jìn)機(jī)體組織再生和增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等功效。近年來，蜂膠產(chǎn)品在市場(chǎng)上受到了廣泛的關(guān)注和認(rèn)可，其種類也日益豐富，主要以膠囊形式呈現(xiàn)。蜂 膠中主要活性成分為黃酮類化合物，已成為研究熱點(diǎn)，且市售的蜂膠膠囊類產(chǎn)品均以總黃酮含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。黃酮類化合物的測(cè)定有多種方法，如液相色譜法﹑分光光度法等，液相色譜法可以測(cè)定單一的黃酮成分，分光光度比色法可以測(cè)定黃酮成分的總量。 紫外分光光度法被廣泛應(yīng)用于測(cè)定蜂膠制品中的總黃酮含量，因?yàn)樗�具有操作�?jiǎn)便、準(zhǔn)確度高且易于實(shí)施的特點(diǎn)，因此深受廣大研究者的青睞。

實(shí)驗(yàn)方法：根據(jù)《蜂膠中總黃酮含量的測(cè)定方法分光光度比色法》（GB/T 20574—2006），利用分光光度比色法對(duì)蜂膠軟膠囊中的總黃酮進(jìn)行定量分析。

試劑

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（含量95.5%，上海安譜璀世標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，批號(hào) 2251131）；

無水乙醇、硝酸鋁、95% 乙醇、醋酸鉀（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司）

儀器

UV-1800 紫外可見分光光度計(jì)（上海美析儀器有限公司）；

超聲波清洗儀；

高速臺(tái)式離心機(jī)；

BT25S 十萬分之一電 子天平、BSA224S-CW 電子天平。

試樣的制備

稱取蜂膠軟膠囊內(nèi)容物0.5 g（精確至1 mg）于燒杯中，加入95%乙醇約30 mL，室溫下超聲提取20 min，將溶液轉(zhuǎn)移至50mL的容量瓶中，加入95%乙醇至刻度線，混合均勻后進(jìn)行過濾，棄去初濾液， 收集濾液待測(cè)。準(zhǔn)確吸取1.0mL待測(cè)溶液于50mL容量瓶中，分別加入1.0 mL硝酸鋁溶液和1.0mL醋酸鉀溶液，加95%乙醇至刻度，搖勻，靜置10 min，3 000 r·min-1離心3min，取上清液待測(cè)。空白實(shí)驗(yàn)精密吸取1.0 mL待測(cè)溶液于50 mL容量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻。用1 cm比色皿，在415 nm以空白試液作參比，測(cè)定樣品吸光度。

標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

稱取10.50mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（含量95.5%）于50 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解，并定容至刻度，搖勻， 溶液濃度為0.2 g·L-1 。吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、1.00 mL、 2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL和6.00 mL（相當(dāng)于蘆丁含量 0 mg、0.2 mg、0.4 mg、0.6 mg、0.8 mg、

1.0 mg 和1.2 mg），分別置于50 mL容量瓶中，向容量瓶中加入1.0mL硝酸鋁溶液和1.0mL醋酸鉀溶液，用95%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置10 min后測(cè)定。

結(jié)果計(jì)算

總黃酮計(jì)算公式為

式中：X 為黃酮類化合物的總含量，%；

m1 為 由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出測(cè)定液中蘆丁質(zhì)量，mg；

m 為樣品的質(zhì)量，g；

d 為稀釋比例。