測(cè)定飼料中單寧的方案（分光光度法）

引言

目，“飼料禁抗”已成為全球畜牧業(yè)生產(chǎn)的趨勢(shì)，對(duì)提高畜產(chǎn)品質(zhì)量安全、增加綠色優(yōu)質(zhì)畜產(chǎn)品供給、降低養(yǎng)殖生產(chǎn)成本、促進(jìn)畜產(chǎn)品出口、實(shí)現(xiàn)畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展意義深遠(yuǎn)。單寧作為替抗產(chǎn)品在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用具有定的可行性。

關(guān)鍵詞  單寧  分光  美析

原理

用丙酮溶液提取飼料中單寧類(lèi)化合物,經(jīng)過(guò)濾后,取濾液加鎢酸鈉-磷鉬酸混合溶液和碳酸鈉溶液，顯色后,以試劑為空白對(duì)照,用分光光度計(jì)于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值,用單寧酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定飼料中單寧含量。

儀器及試劑

美析UV-1500紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):帶10 mm比色皿,可在760 nm處測(cè)定。

電子天平:感量為0.1mg.

粉碎機(jī)。

振蕩儀。

單標(biāo)線吸管:1 mL,10 mL,50 mL,A�？潭任�管:5mL。

容量瓶:50 mL,100 mL,200 mL,A。具塞三角瓶:250 mL。

中速定量濾紙。

除非另有說(shuō)明,本標(biāo)準(zhǔn)中所用試劑均為分析純,水符合GB/T 6682三用水規(guī)定。

鎢酸鈉(Na₂O₄W·2H₂O).

磷鉬酸(H₂Mo₁₂O₄₀P·XH₂O)。

鎢酸鈉-磷鉬酸混合溶液:稱(chēng)取100.0g鎢酸鈉、20.0g磷鉬酸,溶于約750 mL水中，移入1000 mL回流瓶中,加入50 mL磷酸,充分混勻,接上冷凝管,在沸水浴上加熱回流2h,冷卻,轉(zhuǎn)入1000 mL容量瓶中,用水定容至刻度﹐搖勻,過(guò)濾﹐置棕色瓶中保存。室溫下可保存14 d。

無(wú)水碳酸鈉(Na₂CO₃)。

碳酸鈉溶液(75 g/L):稱(chēng)取37.5 g無(wú)水碳酸鈉，溶于250 mL溫水中,混勻,冷卻,稀釋至500 mL,過(guò)濾到儲(chǔ)液瓶中備用。室溫下可保存7d.

丙酮(C₃H₆O)。

丙酮溶液(1＋1,體積比):分取等體積的水和丙酮(4.6),等體積混合,搖勻,即得。

單寧酸標(biāo)準(zhǔn)品(C₇₆ H₅₂O₄₆):含量≥95.0%。

單寧酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱(chēng)取單寧酸標(biāo)準(zhǔn)品適量(精確到0.0001g),加適量水溶解,用水定容至100 mL,搖勻,制成單寧酸質(zhì)量濃度約為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。在冰箱中4℃可保存5d。

單寧酸標(biāo)準(zhǔn)使用液;精密量取單寧酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10.00 mL,置 200 mL容量瓶中,用水定容至200 mL,搖勻。此溶液?jiǎn)螌幩豳|(zhì)量濃度為50 mg/L,用時(shí)現(xiàn)配。

試樣制備

按GB/T 14699.1采樣,按GB/T 20195制備試樣,磨碎,通過(guò)0.45 mm孔篩,混勻,裝入密閉容器中,避光低溫保存?zhèn)溆谩?/span>

分析步驟

試液的制備

稱(chēng)取試樣1 g~2 g(精確至0.000 1 g),置于250 mL具塞三角瓶中,精密加入丙酮溶液50.00 mL,加塞密封,置振蕩儀上振搖40 min,靜置,用中速定量濾紙過(guò)濾,棄去初濾液,續(xù)濾液供測(cè)定用。

測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取單寧酸標(biāo)準(zhǔn)使用液0.00 mL,0.50 mL,1.00 mL,2.00 mL,3.00 mL,4.00 mL、5.00 mL和6.00 mL,分別置盛有約30 mL水的50 mL容量瓶中,搖勻;加鎢酸鈉-磷鉬酸混合溶液2.5 mL,加碳酸鈉溶液5.0 mL,搖勻;分別用水定容至50 mL,播勻。單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為0.00 mg/L,0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L,3.00 mg/L、4.00 mg/L,5.00 mg/L和6.00 mg/L,放置30 min顯色后,以標(biāo)準(zhǔn)曲線0.00 mg/L為空白,在760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,以單寧酸濃度為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

試樣的測(cè)定

精密量取試液1.00 mL,置盛有約30 mL水的50 mL容量瓶中,搖勻;加鎢酸鈉-磷鉬酸混合溶液2.5 mL,加碳酸鈉溶液5.0 mL,搖勻;用水定容至50 mL,搖勻。放置30 min顯色后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0.00 mg/L為空白,在760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定試樣溶液的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出試液中單寧酸的濃度。如果吸光度值超過(guò)6.00 mg/L單寧酸的吸光度時(shí),將試液稀釋后重新測(cè)定。

計(jì)算和結(jié)果的表述

試樣中單寧(以單寧酸計(jì))的含量X,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示,單位為毫克每千克(mg/kg),按式計(jì)算。

式中:

c——試樣測(cè)定液中單寧酸的濃度,單位為毫克每升(mg/L);

v——試樣定容體積,單位毫升(mL);

D——試樣稀釋倍數(shù);

m——試樣質(zhì)量,單位為克(g)。

儀器參數(shù)

UV-1500PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

儀器特點(diǎn)

*采用單片微機(jī)控制，128*64位液晶顯示

*寬大的液晶顯示器可顯示多組數(shù)據(jù)

*巨大的內(nèi)存空間，可存儲(chǔ)多組數(shù)據(jù)和曲線

*自動(dòng)調(diào)0、調(diào)100%功能

*波長(zhǎng)自動(dòng)調(diào)節(jié)

*光源自動(dòng)切換，濾色片自動(dòng)切換

*寬大樣品池（5mm～100mm）

*具有多十點(diǎn)標(biāo)樣建標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)量功能

*可通過(guò)直接輸入K、B因子建立標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量測(cè)量

*可直接輸入標(biāo)樣和對(duì)應(yīng)濃度值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量測(cè)量

*可斷電保存測(cè)量設(shè)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)

*配備通用并行打印接口，可打印標(biāo)題欄、測(cè)量數(shù)據(jù)、曲線參數(shù)、曲線標(biāo)準(zhǔn)樣品點(diǎn)和曲線

*配USB接口

*可通過(guò)PC軟件控制實(shí)現(xiàn)光譜掃描等更精確和靈活的測(cè)量要求

技術(shù)指標(biāo)及基本參數(shù)

*波長(zhǎng)范圍： 190～1100nm

*光譜帶寬： 2nm

*波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：±0.5nm

*波長(zhǎng)重現(xiàn)性：≤0.2nm

*透射比準(zhǔn)確度: ±0.3% τ

*透射比重復(fù)性：0.15% τ

*雜散光：≤0.05% τ (220nm NaI，340nm NaNO2)

*穩(wěn)定性： 0.001A/h（500nm預(yù)熱后）

*測(cè)光方式：透過(guò)率、吸光度、濃度、能量

*波長(zhǎng)調(diào)節(jié)：自動(dòng)調(diào)節(jié)

*光度范圍： -0.3～3A

*顯示方式： 128*64液晶

*檢測(cè)器：進(jìn)口硅光二管

*光源：進(jìn)口氘燈，進(jìn)口鎢燈

*電源： AC 220V/50Hz或110V/60Hz

*功率： 120W

*儀器尺寸：480×350×220mm

*主機(jī)凈重： 15Kg

關(guān)于美析

美析主營(yíng)光譜類(lèi)儀器可見(jiàn)分光光度計(jì)、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、原子吸收光譜儀、超微量分光光度計(jì)、原子熒光光度計(jì)、ICP電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀、ICP電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，目，我們的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于有機(jī)化學(xué)、無(wú)機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保、冶金、石油、農(nóng)業(yè)等域。同時(shí)美析利用在產(chǎn)品機(jī)械結(jié)構(gòu)、光學(xué)設(shè)計(jì)、電氣應(yīng)用和軟件開(kāi)發(fā)方面積累的豐富經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合市場(chǎng)的新實(shí)際需求，近期將陸續(xù)推出批全新的分析類(lèi)儀器