2,4-D 檢測試劑盒
適用
本試劑盒利用免疫學實驗方法對水中的2，4-D進行定量檢測，檢測范圍：0.03-0.5 ng/mL （ppb）。 高濃度樣品可先進行稀釋之后再測定
原理
Beacon公司的2,4-D檢測試劑盒由可以和2，4-D及其酶標記物結(jié)合的多克隆抗體制成。
樣品中的2,4-D 與酶標物競爭結(jié)合抗體有限的結(jié)合點。抗體固定在測試孔的內(nèi)側(cè)用于捕獲2，4-D。檢測過程中：將樣品加入測試孔，之后加入2,4-D酶標記物，酶標記物與樣品中的2，4 -D競爭包被抗體的結(jié)合點，孵育60分鐘，洗脫。在每個孔中加入底物溶液，在2,4-D酶標記物的作用下，底物轉(zhuǎn)化為藍色化合物，一個酶分子可以轉(zhuǎn)化多個底物分子。
每孔中的抗體結(jié)合點數(shù)目是相同的，且每孔加入的2，4-D酶標物數(shù)量也相同，含有低濃度2，4-D的樣品可與較多酶標記物分子結(jié)合，溶液顯深藍色。相反的，高濃度的樣品則 有較少的酶標記物與抗體結(jié)合，得到的溶液顏色較淺。
注意：顏色與2，4-D的 濃度成反比
較深的顏色=較低的濃度
較淺的顏色=較高的濃度
特異性
Beacon 2,4-D檢測試劑盒專門檢測2,4-D 及其相近的化合物。以下表格展示的是相對于2，4-D的交叉反應率
化合物交叉反應率%
2,4-D acid100
2,4-D methyl ester400
2,4-DB100
2,4-D isopropyl ester67
2,4-DB butyl ester53
2,4,5-T9.5
MCPA9.3
Dichlorprop2.7
2,4,5-TP2.2
注意
•不用時將試劑盒儲存于4°C -- 8°C
•不可冷凍或?qū)⑵浔┞对诟哂?7°C的環(huán)境中
•實驗前需將所有的試劑及樣品達到室溫
•不可使用過期試劑盒
•不可混用不同批次的試劑
•使用確證方法確認陽性陽品
試劑盒組成
1 包被有兔抗抗體的微孔板（12×8條）
1瓶 10 ppm 2,4-D 甲醇溶液.
1瓶 2,4-D -HRP 酶標記物
1底物溶液
1瓶停止液
還需設備:
酶標儀
薄膜
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ï84„û²h,ïûÖ100-1000µL的溶液
用于準備標準液的玻璃試管或小瓶
試驗步驟
標準溶液的準備
將 2,4-D 儲備液放至室溫，用蒸餾水稀釋，.稀釋液需當天使用。取3個玻璃試管,分別貼上2.0,20,200的標簽
1. 制備200ppb 標準液.移取200uL的 10 ppm 儲備液至標有200的試管,試管中預先加入 9.8 mL 蒸餾水 ,混勻.
2.制備20ppb 標準液,加1.0mL 的200ppb的溶液至標有20的試管,試管中預先加入 9.0 mL 蒸餾水 ,混勻
3.制備20ppb 標準液,加1.0mL 20ppb 溶液至標有2.0的試管，試管中預先加入 9.0 mL 蒸餾水 ,混勻
4.擰緊裝儲備液瓶塞以防蒸發(fā)損失.
檢測步驟
1. 將所有試劑及樣品置于室溫下
2. 從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3.移取150 µL 標準,制控和樣品至對應微孔中,注意每種溶液使用干凈的吸頭以防交叉污染.
4.加入50 µL 酶標物至每個微孔.
5.快速震蕩使孔中溶液混合并敷上薄膜. 或者微孔板可以放在振蕩器上震蕩孵育
6.孵育60分鐘。
7.孵育完后，去掉封口膜將微孔中的溶液倒入水槽,用冷水徹底充滿微孔之后倒掉,如此重復四次,共五次洗板。在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干
8. 加入100 µL底物溶液至每孔
9 孵育30分鐘
10. 按照加底物的順序每孔加入100 µL 停止液
11. 450nm下讀板，如果酶標儀有雙波長，可同時測605或650nm雙波長。
12.如果酶標儀可以處理數(shù)據(jù)，可用半對數(shù)線性或4參數(shù)曲線擬合，如果為手動計算，則可按照以下部分進行
計算結(jié)果
1．讀板之后，求標準，陰性對照，樣品的平均吸光度值并按以下方法計算%B0:
標準，陰性對照，樣品吸光度值的平均值
%B0 = -------------------------------------------------
陰性對照的平均吸光值
2．以%B0為Y軸，以2,4-D標準濃度的半對數(shù)值為X軸，繪制曲線。
3．通過每個樣品的B0%，在圖上計算出微囊藻毒素的濃度。
4．如果樣品B0%在設定的標準B0%范圍之內(nèi)，就可以得出一個具體的濃度值。如果樣品B0%出了范圍只能說明樣品的濃度大于高濃度的標準或低于低濃度的標準。
樣品計算
物質(zhì)（ppb）吸光度平均吸光度+/- SD%RSD%Bo
陰性對照1.1381.1111.125 +/- 0.00191.7100
2.00.9770.9450.961 +/- 0.0232.385.5
200.6900.6570.674 +/- 0.0233.559.9
2000.2950.2790.287 +/- 0.0113.925.5
質(zhì)量控制
1.標準品的%B0值應該處于下面的范圍之內(nèi):
2,4-D 濃度(ppb) %Bo 范圍
2.0 84 - 90
20 57 - 63
200 22 - 28
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