Atrazine檢測(cè)試劑盒
適用
Beacon Atrazine檢測(cè)試劑盒適用于水中殘留Atrazine殺蟲劑的定量檢測(cè)。
檢測(cè)原理
Beacon公司的Atrazine檢測(cè)試劑盒由可以和Atrazine及Atrazine酶標(biāo)記物結(jié)合的多克隆抗體制成。樣品中的Atrazine與Atrazine酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合數(shù)量有限的抗體結(jié)點(diǎn)。測(cè)試孔中固定有抗體，用于捕獲加入的Atrazine
實(shí)驗(yàn)過程中，將樣品加入測(cè)試孔，之后加入酶標(biāo)物，酶標(biāo)物與樣品中Atrazine競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體得結(jié)合點(diǎn)。孵育60分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的分子。每孔中加入干凈的底物溶液，連接的酶結(jié)合物可以將底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色化合物，一個(gè)酶分子可以轉(zhuǎn)化多個(gè)底物分子。
由于各個(gè)孔中抗體可結(jié)合位點(diǎn)是相同的，并且加入的Atrazine酶標(biāo)記物的量也是相同的，樣品中Atrazine含量低的則酶標(biāo)記物結(jié)合得多，顏色會(huì)顯深藍(lán)色。反之，樣品中Atrazine含量高的則酶標(biāo)記物結(jié)合得少，顏色會(huì)顯淺藍(lán)色。
注意：顏色與Atrazine的含量成反比。
較深的顏色=較低的濃度
較淺的顏色=較高的濃度
特異性：
Beacon Atrazine 檢測(cè)試劑盒沒有區(qū)分Atrazine及其它類型，然而可以不同程度的測(cè)到Atrazine其它類型，以下表格中展示的是50% Bo相關(guān)值及交叉反映率（%CR），以下所有濃度均為ppb級(jí)。

化合物50% Bo%CR
Atrazine0.50100
Prometryne0.12420
Ametryne0.16310
Propazine0.38130
Prometon1.338
Simetryne0.9056
Terbutryne1.436
Simazine6.28.1
Terbuthylazine153.3
De-ethylated atrzine192.6
Cyanazine770.65
De-isopropyl atrazine1200.42
Cyromazine1,6000.031
Melamine〉10,000〈0.005
Diamino atrazine〉10,000〈0.005

以下化合物在10，000 ppb該試劑盒檢測(cè)不到
AlachlorMetolachlorCarbofuran
Aldicarb2.4-DCarbendazim


精確度
不同時(shí)間的四組實(shí)驗(yàn)，每組為兩個(gè)質(zhì)控樣的四個(gè)平行樣品 .平均精確度如下：
平均值 (ppb)Std. Dev. (ppb)%RSD
質(zhì)控 I0.0900.01011
質(zhì)控II3.20.134.1





不同時(shí)間的8組實(shí)驗(yàn)，每組兩個(gè)制控樣. 平均精確度如下：

平均值(ppb)Std. Dev. (ppb)%RSD
質(zhì)控 I0.0870.00910
質(zhì)控 II3.20.123.8
注意
1．不用時(shí)請(qǐng)將試劑盒儲(chǔ)存于4-8℃。
2．不可冷凍試劑盒，不可使其暴露在大于37℃環(huán)境中。
3．開始實(shí)驗(yàn)前，所有試劑達(dá)到室溫。
4．不可使用過期試劑。
5．不同批次的試劑不可混用。
6．使用確證方法確認(rèn)陽(yáng)性樣品。
試劑盒組成
1．包被有兔抗體的的微孔板 （12×8條）
2．陰性對(duì)照品一瓶（0ppb Atrazine）
3．0.05ppb,0.5ppb,5.0ppb 的Atrazine標(biāo)準(zhǔn)品各一瓶
4．1.0ppb Atrazine質(zhì)量控制液一瓶（瓶上標(biāo)有精確范圍）
5．Atrazine-HRP酶標(biāo)記物一瓶
6．底物一瓶
7. 停止液一瓶
另需：
酶標(biāo)儀
薄膜
計(jì)時(shí)器或表
蒸餾水或去離子水
振蕩器
檢測(cè)程序
1．將所有試劑及樣品置于室溫下。
2．從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3．移取100 µL of 標(biāo)準(zhǔn)品制控和樣品至對(duì)應(yīng)微孔, 須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。
4. 在每孔種加入 100 µL酶標(biāo)記物
5. 快速震蕩使孔中的溶液混合，并敷上薄膜，或者微孔板可以放在振蕩器上震蕩孵育，從而達(dá)到在孵育期間持續(xù)震蕩的效果。
6. 孵育 60分鐘
7. 孵育完后，去掉封口膜將微孔中的溶液倒入水槽,用冷水徹底充滿微孔之后倒掉,如此重復(fù)四次,共五次洗板，在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干
8. 每個(gè)微孔中加入100ul底物溶液。
9. 蓋上小孔并孵育30分鐘。
10. 按照加底物的順序每孔中加入100ul停止液。停止液為1 N鹽酸，需小心操作。
11. 450nm下讀板，如果酶標(biāo)儀有雙波長(zhǎng)，可同時(shí)測(cè)605或650nm雙波長(zhǎng)。
12. 如果酶標(biāo)儀可以處理數(shù)據(jù)，可用半對(duì)數(shù)線性或4參數(shù)曲線擬合，如果為手動(dòng)計(jì)算，則可按照以下部分進(jìn)行。
計(jì)算結(jié)果
1．讀板之后，求標(biāo)準(zhǔn)，陰性對(duì)照，樣品的平均吸光度值并按以下方法計(jì)算%B0:
2．
標(biāo)準(zhǔn)，陰性對(duì)照，樣品吸光度值的平均值
%B0 = -------------------------------------------------------
陰性對(duì)照的平均吸光值

3．以%B0為Y軸，以Atrazine標(biāo)準(zhǔn)濃度的半對(duì)數(shù)值為X軸，繪制曲線。
4．通過每個(gè)樣品的B0%，在圖上計(jì)算出Atrazine的濃度。
5．如果樣品B0%在設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)B0%范圍之內(nèi)，就可以得出一個(gè)具體的濃度值。如果樣品B0%出了范圍只能說明樣品的濃度大于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)或低于低濃度的標(biāo)準(zhǔn)。

質(zhì)量控制
1.標(biāo)準(zhǔn)品的 %Bo 應(yīng)在以下范圍
Atrazine 標(biāo)準(zhǔn) (ppb)%Bo 范圍
0.0578 - 88
0.546 - 56
5.016 - 27
2. 質(zhì)控樣的值應(yīng)在瓶外所標(biāo)范圍
樣品計(jì)算
物質(zhì)（ppb）OD平均習(xí)吸光度值 ± SD%RSD%BoAtrazine 濃度(ppb)
陰性對(duì)照 1.5381.523 ± 0.0211.4100.0N/A
1.508
0.05 1.2801.269 ± 0.0151.283.3N/A
1.259
0.5 0.7890.774 ± 0.0222.850.8N/A
0.758
5.0 0.3340.332 ± 0.0020.621.8N/A
0.331

樣品0.4280.418 ± 0.0143.427.43.14
0.408




實(shí)際值范圍可能較大，此數(shù)據(jù)值僅作為示例
：標(biāo)準(zhǔn)偏差