嘔吐毒素DON高靈敏度檢測(cè)試劑盒
適用
Beacon脫氧雪腐鐮刀菌烯醇高靈敏度檢測(cè)試劑盒利用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附原理定量檢測(cè)谷物及谷物產(chǎn)品以及麥芽中的嘔吐毒素。

檢測(cè)原理
Beacon脫氧雪腐鐮刀菌烯醇高靈敏度檢測(cè)試劑盒是基于競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法。用水震蕩萃取粉碎樣品中的DON,過(guò)濾水相萃取物，然后進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。加入嘔吐毒素的酶標(biāo)記物到已加有標(biāo)準(zhǔn)或樣品的測(cè)試孔中，抗體被加入后反應(yīng)開(kāi)始，樣品及酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合連接在微孔上的抗體，10分鐘培養(yǎng)后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的結(jié)合嘔吐毒素和酶標(biāo)記物。加入無(wú)色的底物溶液，培養(yǎng)5分鐘，所有結(jié)合的酶標(biāo)記物使底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì)。加入停止液然后讀取吸光度值，未知濃度樣品與標(biāo)準(zhǔn)吸光度值進(jìn)行比較，就可以得到樣品的嘔吐毒素濃度。

注意事項(xiàng)
1．任何含有DON的溶液都必須作為危險(xiǎn)材料進(jìn)行處理。始終使用手套，防護(hù)衣以及適當(dāng)?shù)姆绞绞⒎呕蛱幚磉@樣的材料。
2．不可使用過(guò)期試劑。
3．試劑盒之間不可交換使用。
4．所有試劑不使用時(shí)保存于2-8℃下。
5． DON為極毒物質(zhì)，將所有丟棄的液體倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中，所有的實(shí)驗(yàn)器具必須在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小時(shí)，戴上手套穿上防護(hù)服以避免皮膚及黏膜與試劑或樣品萃取物接觸，如果一旦接觸，必須立即用大量水沖洗。
6．試劑盒不能冷凍或暴露于大于37℃的溫度下。
7．開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前試劑須置于室溫（20-28℃），通常在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至少30分鐘前拿出試劑盒回溫。
8．確認(rèn)任何陽(yáng)性樣品應(yīng)當(dāng)使用認(rèn)可方法。

試劑及材料

1．包被有抗體的96孔微孔板及96次紅色混合微孔板。
2．5瓶4ml濃度為0，0.025，0.050,0.125,0.250 ug/ml（ppm）的DON標(biāo)準(zhǔn)品，（注意：因?yàn)楣任飿悠吩谳腿∵^(guò)程中1：5稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際上為設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)濃度的1/5，原始樣品的濃度無(wú)需換算。）
3．1瓶12mlDON的酶標(biāo)記物。
4．1瓶12ml的底物溶液
5．1瓶12ml的停止液（注意：1N 鹽酸，小心操作�。�
6．1瓶50ml的20倍濃縮清洗濃縮液
7．操作說(shuō)明書(shū)

所需材料（不提供）
1．實(shí)驗(yàn)室用蒸餾水或去離子水
2．100ml量筒
3．用于萃取樣品及收集萃取液玻璃器皿
4．濾紙，Whatman NO.4及相當(dāng)者
5．可吸取100ul容量的移液器及一次性吸頭
6．可吸取100ul的八道移液器及一次性吸頭
7．吸水紙
8．450nm的酶標(biāo)儀
9．計(jì)時(shí)器

樣品的準(zhǔn)備
1．粉碎好的樣品過(guò)20目篩并徹底混合，不能立即分析的樣品需冷凍儲(chǔ)存。
2．稱取20g樣品，量取100ml水到一有蓋容器中。
3．用手或漩渦混合器劇烈震蕩3分鐘。
4．靜置2-3分鐘，使樣品沉淀。
5．用Whatman1#玻璃纖維濾紙過(guò)濾15ml萃取液，收集濾液到一干凈容器中。

清洗液的準(zhǔn)備
1．將清洗濃縮液倒入1L容積的容器中，加入實(shí)驗(yàn)室用蒸餾水。漩渦混合。
2．將配好的清洗液轉(zhuǎn)移至洗瓶中。

檢測(cè)程序（注意標(biāo)準(zhǔn)及樣品做重復(fù)，可以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度及精確度）
1．開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前確定所有試劑盒中試劑達(dá)到室溫。
2．取適量的紅色混合孔條以及干凈測(cè)試孔固定在微孔板架上。確定未使用的孔條，與干燥劑一同放入密封袋中保存。
3．移取100ul的標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品到對(duì)應(yīng)的紅色混合孔中，每次使用干凈的吸頭。
4．加入100ul的酶標(biāo)記物到每個(gè)紅色混合孔中。
5．用多道移液器，重復(fù)吸出并注入混合孔中的物質(zhì)，使小孔中的物質(zhì)充分混合。
6．移取100ul的反應(yīng)混合物到相應(yīng)的干凈測(cè)試孔中，丟棄紅色混合孔條到廢物桶中。
7．加入50ul的樣品及標(biāo)準(zhǔn)品到相應(yīng)的孔中，注意使用一次性吸頭防止交叉污染
8．室溫下孵育干凈孔條10分鐘。
9．倒掉微孔中溶液到廢物桶中，翻轉(zhuǎn)微孔板并在吸水紙上拍趕所有以液體，用多道移液器加入300ul的清洗液到微孔中，然后到掉，重復(fù)4次，共五次洗板。（最后一次拍板后，檢查微孔中是否有大的水泡，如果有，用干凈吸頭挑破，并拍出）
10．每孔中加入100ul的底物溶液。
11．室溫下孵育5分鐘。
12．每孔中加入100ul停止液。
13．450nm讀吸光度值。

結(jié)果判斷
半定量結(jié)果的判定，可根據(jù)樣品的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值來(lái)判定
樣品的顏色比某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的顏色淺時(shí)，則說(shuō)明樣品的DON含量大于此標(biāo)準(zhǔn)的DON濃度
樣品的顏色比某個(gè)樣品的顏色深時(shí)，則說(shuō)明樣品的DON含量小于此標(biāo)準(zhǔn)的DON濃度。

定量結(jié)果判定，需要以標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)濃度的對(duì)數(shù)為Y軸繪制曲線圖，將標(biāo)準(zhǔn)濃度及吸光度值的點(diǎn)用直線連接，根據(jù)樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相應(yīng)樣品的濃度，如果樣品的吸光度值大于最大標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值或小于最小樣品的吸光度值，即可說(shuō)明此樣品中DON的含量小于0.025ppm或大于0.25ppm。