微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒
適用
Beacon微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒適用于水中微囊藻毒素的定量檢測(cè)。

檢測(cè)原理
Beacon微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒由可以和微囊藻毒素及微囊藻毒素酶標(biāo)記物結(jié)合的多克隆抗體制成。樣品中的微囊藻毒素與微囊藻毒素酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合數(shù)量有限的抗體結(jié)點(diǎn)。
檢測(cè)過程中， 先加入微囊改造毒素酶標(biāo)記物及含有微囊藻毒素的樣品到測(cè)試孔中接著加入抗體，酶標(biāo)記物與樣品中的微囊藻毒素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合同樣的抗體的結(jié)合點(diǎn)。測(cè)試孔中包被有抗兔IgG，用于捕獲加入的兔抗微囊藻毒素抗體。
孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的分子。每孔中加入干凈的底物溶液，連接的酶結(jié)合物可以將底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色化合物，一個(gè)酶分子可以轉(zhuǎn)化多個(gè)底物分子。
由于各個(gè)孔中抗體可結(jié)合位點(diǎn)是相同的，并且加入的微囊藻毒素酶標(biāo)記物的量也是相同的，樣品中微囊藻毒素含量低的則酶標(biāo)記物結(jié)合得多，顏色會(huì)顯深藍(lán)色。反之，樣品中微囊藻毒素含量高的則酶標(biāo)記物結(jié)合得少，顏色會(huì)顯淺藍(lán)色。
注意：顏色與微囊藻毒素的含量成反比。
較深的顏色=較低的濃度
較淺的顏色=較高的濃度

特性：
特異性
Beacon微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒沒有區(qū)分微囊藻毒素-LR(作為標(biāo)準(zhǔn)品)及其它類型，然而可以測(cè)到微囊藻毒素的其它類型，以下表格中展示的是相關(guān)值及交叉反映率（%CR），以下所有濃度均為ppb級(jí)。

種類%CR
微囊藻毒素-LR100
微囊藻毒素-RR87
微囊藻毒素-YR48
Nodularin31

注意
1．不用時(shí)請(qǐng)將試劑盒儲(chǔ)存于4-8℃。
2．不可冷凍試劑盒，不可使其暴露在大于37℃環(huán)境中。
3．開始實(shí)驗(yàn)前，所有試劑達(dá)到室溫。
4．不可使用過期試劑。
5．不同批次的試劑不可混用。
6．使用確證方法確認(rèn)陽(yáng)性樣品。

試劑盒組成
1．包被有羊抗兔抗體的的微孔板 （12×8條）
2．陰性對(duì)照品一瓶（0ppb微囊藻毒素-LR）
3．0.1ppb,0.3ppb,0.8ppb,2ppb微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)品各一瓶
4．1.0ppb微囊藻毒素-LR質(zhì)量控制液一瓶
5．微囊藻毒素HRP酶標(biāo)記物一瓶
6．兔抗微囊藻毒素抗體溶液一瓶
7．底物一瓶
8．停止液一瓶（注意！1N 鹽酸，小心處理）
9．100×清洗液

需要設(shè)備
酶標(biāo)儀
薄膜
計(jì)時(shí)器或表
蒸餾水或去離子水
振蕩器

檢測(cè)程序
1．將所有試劑及樣品置于室溫下。
2．從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3．稀釋100倍濃縮清洗液為1倍清洗液，例：取5ml 100倍清洗液到500ml洗瓶中并加入495ml蒸餾水。
4．吸取50ul酶標(biāo)記物到微孔板的每個(gè)孔中。
5．吸取50ul標(biāo)準(zhǔn)，陰性對(duì)照，樣品到對(duì)應(yīng)微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。
6．加入50ul抗體溶液到每個(gè)小孔中。
7．快速震蕩使孔中的溶液混合，并敷上薄膜，或者微孔板可以放在振蕩器上震蕩孵育，從而達(dá)到在孵育期間持續(xù)震蕩的效果。
8．孵育30分鐘。
9．孵育完后，去掉封口膜將微孔中的溶液倒入水槽中，用1倍清洗液清洗完全充滿微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)四次，總共五次洗板。在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干。
10．每個(gè)微孔中加入100ul底物溶液。
11．蓋上小孔并孵育30分鐘。
12．按照加底物的順序每孔中加入100ul停止液。停止液為1 N鹽酸，需小心操作。
13．450nm下讀板，如果酶標(biāo)儀有雙波長(zhǎng)，可同時(shí)測(cè)605或650nm雙波長(zhǎng)。
14．如果酶標(biāo)儀可以處理數(shù)據(jù)，可用半對(duì)數(shù)線性或4參數(shù)曲線擬合，如果為手動(dòng)計(jì)算，則可按照以下部分進(jìn)行。

計(jì)算結(jié)果
1．讀板之后，求標(biāo)準(zhǔn)，陰性對(duì)照，樣品的平均吸光度值并按以下方法計(jì)算%B0:
標(biāo)準(zhǔn)，陰性對(duì)照，樣品吸光度值的平均值
%B0 = ---------------------------
陰性對(duì)照的平均吸光值
2．以%B0為Y軸，以微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)濃度的半對(duì)數(shù)值為X軸，繪制曲線。
3．通過每個(gè)樣品的B0%，在圖上計(jì)算出微囊藻毒素的濃度。
4．如果樣品B0%在設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)B0%范圍之內(nèi)，就可以得出一個(gè)具體的濃度值。如果樣品B0%出了范圍只能說明樣品的濃度大于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)或低于低濃度的標(biāo)準(zhǔn)。

質(zhì)量控制
1．標(biāo)準(zhǔn)品的%B0值應(yīng)該處于下面的范圍之內(nèi)：


微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)（ppb）%B0范圍
0.171-87
0.354-65
0.835-44
2.019-29

2．樣品計(jì)算

物質(zhì)吸光度值平均吸光度值 ±SD%RSD%B0濃度(ppb)
陰性對(duì)照1.4781.5521.515±0.0523.4100N/A
0.11.2551.1941.225±0.0433.580.8N/A
0.30.9410.9320.937±0.0060.6861.8N/A
0.80.6260.6020.614±0.0172.740.5N/A
2.00.3890.3860.388±0.0080.5425.6N/A
樣品0.6100.6340.622±0.0172.731.50.909