T2毒素檢測(cè)試劑盒
適用
Beacon T2毒素檢測(cè)試劑盒利用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附原理定量檢測(cè)玉米，玉米粉，玉米胚芽粉，玉米麩質(zhì)粉以及玉米大豆混合物中的T2毒素。

檢測(cè)原理
Beacon T2毒素檢測(cè)試劑盒是基于競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法。用甲醇/水震蕩萃取粉碎樣品中的T2毒素,過濾萃取物并稀釋，然后進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。加T2毒素的酶標(biāo)記物到測(cè)試微孔中，接下來加入標(biāo)準(zhǔn)及樣品，T2毒素抗體加入后反應(yīng)開始，10分鐘培養(yǎng)過程中，樣品中的T2毒素及T2毒素酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合連接在微孔上的抗體，10分鐘培養(yǎng)后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的結(jié)合酶標(biāo)記毒素。加入無色的底物溶液，所有結(jié)合的酶標(biāo)記物使底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì)，培養(yǎng)5分鐘，加入反應(yīng)停止液并且每個(gè)微孔中的顏色是可讀的，未知濃度樣品與標(biāo)準(zhǔn)物的顏色進(jìn)行比較，就可以得到樣品的T2毒素濃度。

靈敏性
Beacon T2 毒素試劑盒適用于谷物及谷物制品中T2毒素的定量分析，檢測(cè)范圍為0.025到0.5mg/kg（ppm）如果樣品中的T2毒素含量小于0.025ppm，報(bào)告就應(yīng)該寫成＜0.025ppm.T2毒素含量大于0.5ppm,就應(yīng)該寫成＞0.5ppm。對(duì)于大于0.5ppm的樣品可以用7%的甲醇水稀釋并重新作定量分析。

特異性
Beacon T2毒素檢測(cè)試劑盒所用抗體對(duì)于T2毒素及相關(guān)化合物具有很強(qiáng)的特異性。以T2毒素為標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)的交叉反應(yīng)率在以下表格中。
化合物%交叉反應(yīng)率
HT-238%
T-2 Triol1.6%
T-2 Tetraol〈0.04%
Verrucarol〈0.04%

試劑及提供材料
原裝試劑盒儲(chǔ)存于2-8℃，在有效期前時(shí)試劑盒可以放心使用。
Ÿ真空包裝，包含干燥劑的8×12的微孔板
Ÿ5瓶2ml濃度分別為0，0.025，0.075,0.2 和0.5 mg/kg（ppm）T2毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，（注意：因?yàn)楣任飿悠吩谳腿∵^程中1：5稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際上為設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)濃度的1/5，所以原樣品的濃度無需校正）。
Ÿ1瓶8ml的T2毒素酶標(biāo)記物。
Ÿ1瓶8ml的兔抗T2毒素抗體。
Ÿ1瓶14ml的底物溶液
Ÿ1瓶14ml的停止液（注意：1N 鹽酸，小心操作�。�
Ÿ操作說明書

注意事項(xiàng)
1．每種試劑最適用于Beacon T2毒素試劑盒。其他生產(chǎn)商的試劑不可替代本試劑盒中的任何試劑，不同批次之間的試劑不可混用。
2．被稀釋或污染的試劑及程序中未提及的樣品種類都會(huì)導(dǎo)致結(jié)果失真。
3．不可使用過期試劑。
4．開始實(shí)驗(yàn)前試劑須回溫到室溫（20-28℃）,但避免試劑在室溫存放過久（＞24小時(shí)）。
5．T2毒素為極毒物質(zhì)，將所有丟棄的液體倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中，所有的實(shí)驗(yàn)器具必須在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小時(shí)，戴上手套穿上防護(hù)服以避免皮膚及黏膜與試劑或樣品萃取物接觸，如果一旦接觸，必須立即用大量水沖洗。
6．停止液為1N 鹽酸，避免皮膚及黏膜接觸，如果有濺出，立即清除并用大量水沖洗。

所需材料（不提供）
1．實(shí)驗(yàn)室用蒸餾水或去離子水
2．色譜級(jí)甲醇
3．量筒,100ml或更大容量。
4．用于萃取樣品及收集萃取液玻璃器皿
5．濾紙，Whatman GF/A及相當(dāng)者
6．可吸取50ul容量的移液器及一次性吸頭
7．可吸取50ul或100ul的八道移液器及一次性吸頭
8．吸水紙或相當(dāng)?shù)奈�水材�?br>9．450nm的酶標(biāo)儀
10．計(jì)時(shí)器

萃取溶液準(zhǔn)備
1．仔細(xì)量取30ml去離子水或蒸餾水，并轉(zhuǎn)移至一個(gè)帶有蓋子的干凈容器內(nèi)。
2．仔細(xì)量取70ml甲醇至上述容器內(nèi)。
3．蓋緊蓋子，充分混合，以備使用，并防止揮發(fā)。

樣品的準(zhǔn)備
1．粉碎好的樣品過20目篩并在取樣前充分混合，不立即分析的樣品應(yīng)放在冰箱中儲(chǔ)存。
2．稱取20g樣品，并量取100ml甲醇：水（7：3）溶液，至一有蓋容器中。
3．蓋好蓋劇烈震蕩3分鐘。
4．靜置2-3分鐘，使樣品沉淀。
5．用Whatman GF/A玻璃纖維濾紙過濾15ml萃取液，收集濾液到一干凈容器中。

檢測(cè)程序（注意標(biāo)準(zhǔn)及樣品做平行實(shí)驗(yàn)，可以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度及精確度）
1．開始實(shí)驗(yàn)前要求試劑及樣品萃取液達(dá)到室溫。
2．取適量的孔條固定在微孔板架上，未使用的孔條，與干燥劑一同放入密封袋中保存。
3．加入50ul的酶標(biāo)記物到微孔中。
4．加入50ul的樣品及標(biāo)準(zhǔn)品到相應(yīng)的孔中，注意使用一次性吸頭防止交叉污染
5．加入50ul抗體溶液到微孔中，輕微震蕩微孔板。
6．室溫下孵育10分鐘。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注滿蒸餾水，然后到掉，重復(fù)4次，共五次洗板。
8．最后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻轉(zhuǎn)微孔板在吸水紙上拍干。
9．每孔中加入100ul的底物溶液。
10．室溫下孵育5分鐘。
11．每孔中加入100ul停止液。
12．450nm讀吸光度值。

結(jié)果判斷
1．半定量結(jié)果的判定，可根據(jù)樣品的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值來判定，樣品的吸光度值低于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的T2毒素含量大于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度，樣品的吸光度值高于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的T2毒素含量小于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度。
2．定量結(jié)果判定，需要以標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)濃度的半對(duì)數(shù)為Y軸繪制曲線圖，將標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)用直線連接，樣品的吸光度值也位于這條直線上，在Y軸上即可找到相應(yīng)樣品的濃度，如果樣品的吸光度值大于最大標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值或小于最小樣品的吸光度值，即可說明此樣品中T2毒素的含量小于0.025ppm或大于0.5ppm。