氣相色譜-質(zhì)譜法的定量限為0.05 mg/kg（其中氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法的定量限為0.005 mg/kg）

第三法氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS和GC-MS/MS）
5.1 原理
試樣經(jīng)超聲提取、固相萃取凈化后，進(jìn)行硅烷化衍生，衍生產(chǎn)物采用選擇離子監(jiān)測(cè)質(zhì)譜掃描模式
（SIM）或多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)譜掃描模式（MRM），用化合物的保留時(shí)間和質(zhì)譜碎片的豐度比定性，外標(biāo)
法定量。
相對(duì)離子豐度>50% >20%至50% >10%至20% ≤10%
允許的相對(duì)偏差±20% ±25% ±30% ±50%
GB/T 22388—2008
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5.2 試劑與材料
除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
5.2.1 吡啶：優(yōu)級(jí)純。
5.2.2 乙酸鉛。
5.2.3 衍生化試劑：N,O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）＋三甲基氯硅烷（TMCS）（99＋1），
色譜純。
5.2.4 乙酸鉛溶液（22 g/L）：取22 g 乙酸鉛用約300 mL 水溶解后定容至1 L。
5.2.5 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確吸取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.2.12）1 mL 于100 mL 容量瓶中，用甲醇
定容至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL 相當(dāng)于10 μg 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，于4℃冰箱內(nèi)儲(chǔ)存，有效期3 個(gè)月。
5.2.6 氬氣：純度大于等于99.999％。
5.2.7 氦氣：純度大于等于99.999％。
5.2.8 其他同3.2。
5.3 儀器和設(shè)備
5.3.1 氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）儀：配有電子轟擊電離離子源（EI）。
5.3.2 氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（GC-MS/MS）儀：配有電子轟擊電離離子源（EI）。
5.3.3 電子恒溫箱。
5.3.4 其他同3.3。
5.4 樣品處理
5.4.1 GC-MS法
5.4.1.1 提取
5.4.1.1.1 液態(tài)奶、奶粉、酸奶和奶糖等
稱取5 g（精確至0.01 g）樣品于50 mL具塞比色管，加入25 mL三氯乙酸溶液（3.2.8），渦漩振蕩30 s，
再加入15 mL三氯乙酸溶液，超聲提取15 min，加入2 mL乙酸鉛溶液（5.2.4），用三氯乙酸溶液定容至
刻度。充分混勻后，轉(zhuǎn)移上層提取液約30 mL至50 mL離心試管，以不低于4000 r/min離心10 min。上清
液待凈化。
5.4.1.1.2 奶酪、奶油和巧克力等
稱取5 g（精確至0.01g）樣品于50 mL具塞比色管中，用5 mL熱水溶解（必要時(shí)可適當(dāng)加熱），再加
入20 mL三氯乙酸溶液（3.2.8），渦漩振蕩30 s，再加入15 mL三氯乙酸溶液超聲提取及以下操作同
5.4.1.1.1。若樣品中脂肪含量較高，可以先用乙醚脫脂后再用三氯乙酸溶液提取。
5.4.1.2 凈化
準(zhǔn)確移取5 mL的待凈化濾液至固相萃取柱（3.2.13）中。再用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，棄淋洗液，
抽近干后用3 mL氨化甲醇溶液（3.2.9）洗脫，收集洗脫液，50℃下氮?dú)獯蹈伞?br />5.4.2 GC-MS/MS法
5.4.2.1 奶粉、奶酪、奶油、巧克力和奶糖等
稱取0.5 g（精確至0.01 g）試樣，加入5 mL甲醇水溶液（3.2.7），渦旋混勻2 min后，超聲提取15 min ~20
min，以不低于4000 r/min離心10 min，取上清液200 μL用微孔濾膜（3.2.16）過濾，50℃下氮?dú)獯蹈伞?br />5.4.2.2 液態(tài)奶和酸奶等
稱取1 g（精確至0.01 g）試樣，加入5 mL甲醇，渦旋混勻2 min后，超聲提取及以下操作同5.4.2.1。
5.4.3 衍生化
取上述氮?dú)獯蹈蓺埩粑�，加�?00 μL的吡啶和200 μL衍生化試劑（5.2.3），混勻，70℃反應(yīng)30 min
后，供GC-MS或GC-MS/MS法定量檢測(cè)或確證。
GB/T 22388—2008
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5.5 氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定
5.5.1 儀器參考條件
5.5.1.1 GC-MS參考條件
a） 色譜柱：5%苯基二甲基聚硅氧烷石英毛細(xì)管柱，30 m×0.25 mm（i.d.）×0.25 μm，或相當(dāng)者。
b） 流速：1.0 mL/min。
c） 程序升溫：70℃保持1 min，以10℃/min 的速率升溫至200℃，保持10 min。
d） 傳輸線溫度：280℃。
e） 進(jìn)樣口溫度：250℃。
f） 進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。
g） 進(jìn)樣量：1 μL。
h） 電離方式：電子轟擊電離（EI）。
i） 電離能量：70 eV。
j） 離子源溫度：230℃。
k） 掃描模式：選擇離子掃描，定性離子m/z 99、171、327、342，定量離子m/z 327。
5.5.1.2 GC-MS/MS 參考條件
a） 色譜柱：5%苯基二甲基聚硅氧烷石英毛細(xì)管柱，30 m×0.25 mm（i.d.）×0.25 μm，或相當(dāng)者。
b） 流速：1.3 mL/min。
c） 程序升溫：75℃保持1 min，以30℃/min 的速率升溫至220℃，再以5℃/min 的速率升溫至250℃，
保持2 min。
d） 進(jìn)樣口溫度：250℃。
e） 接口溫度：250℃。
f） 進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。
g） 進(jìn)樣量：1 μL。
h） 電離方式：電子轟擊電離（EI）。
i） 電離能量：70 eV。
j） 離子源溫度：220℃。
k） 四級(jí)桿溫度：150℃。
l） 碰撞氣：氬氣，1.8 mTorr。
m） 碰撞能量：15 V。
n） 掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），定量離子m/z 342>327，定性離子m/z 342>327，342>171。
5.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
5.5.2.1 GC-MS法
準(zhǔn)確吸取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（5.2.5）0、0.4、0.8、1.6、4、8、16 mL 于7 個(gè)100 mL 容量瓶中，用
甲醇稀釋至刻度。各取1 mL 用氮?dú)獯蹈�，按�?.4.3 步驟衍生化。配制成衍生產(chǎn)物濃度分別為0、0.05、0.1、
0.2、0.5、1、2 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。反應(yīng)液供GC-MS 測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，定量離子
質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液的GC-MS 選擇離子質(zhì)量色譜圖參見附錄A 中
的圖A.3，三聚氰胺衍生物選擇離子質(zhì)譜圖參見附錄A 中的圖A.4。
5.5.2.2 GC-MS/MS法
準(zhǔn)確吸取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（5.2.5）0、0.04、0.08、0.4、0.8、4、8 mL分別于7個(gè)100 mL容量瓶中，
用甲醇稀釋至刻度。各取1 mL用氮?dú)獯蹈�，按�?.4.3步驟衍生化。配制成衍生化產(chǎn)物濃度分別為0、0.005、
0.01、0.05、0.1、0.5、1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。反應(yīng)液供GC-MS/MS測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，
定量離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液的GC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖
參見附錄A中的圖A.5。
5.5.3 定量測(cè)定
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待測(cè)樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)對(duì)凈化液稀釋，重新衍
生化后再進(jìn)樣分析。
5.5.4 定性判定
5.5.4.1 GC-MS 法
以標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間和監(jiān)測(cè)離子（m/z 99、171、327 和342）定性，待測(cè)樣品中4 個(gè)離子（m/z
99、171、327 和342）的豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品的相同離子豐度比相差不大于20%。
5.5.4.2 GC-MS/MS 法
以標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間以及多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子（m/z 342>327、342>171）定性，其他定性判定原則
同4.5.5。
5.5.5 結(jié)果計(jì)算
同3.5.4。
5.6 空白實(shí)驗(yàn)
除不稱取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。
5.7 方法定量限
本方法中，氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS法）的定量限為0.05 mg/kg，氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法（GC-MS/MS
法）的定量限為0.005 mg/kg。
5.8 回收率
GC-MS法：在添加濃度0.05 mg/kg～2 mg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在70%～110%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏
差小于10%。
GC-MS/MS法：在添加濃度0.005 mg/kg～1 mg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在90%～105%之間，相對(duì)標(biāo)
準(zhǔn)偏差小于10%。
5.9 允許差
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的15%。

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