
您的位置:首頁 > 技術(shù)文獻(xiàn) > 氣體稀釋儀 > 臨床血液學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)發(fā)展
臨床血液學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)是最早應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室診斷的主要部分。20 世紀(jì) 50 年代,我國臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)室開展的臨床檢驗(yàn),絕大部分是血液學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目。一架顯微鏡、幾支吸血管、一塊血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、一個(gè)目視比色計(jì)加上一些玻璃片、染色液等,就是血液學(xué)檢驗(yàn)的全部“家當(dāng)”〔 1 〕。建立在這些簡陋設(shè)備基礎(chǔ)上的血液學(xué)檢驗(yàn),為早期的血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)知識的普及打下了基礎(chǔ),并為很多血液病和非血液病的診斷做出了貢獻(xiàn)。其中有些實(shí)驗(yàn)診斷方法至今仍然是經(jīng)典的方法。然而,毋庸諱言,這些以手工為基礎(chǔ)的傳統(tǒng)方法,大多數(shù)工作效率低、勞動強(qiáng)度大。由于實(shí)驗(yàn)室手段落后,方法的精密度和準(zhǔn)確度都相對較差,難以滿足當(dāng)今臨床診斷的需求。
隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各學(xué)科的相互滲透,當(dāng)代的臨床血液學(xué)檢驗(yàn)已發(fā)生根本性變化。在檢驗(yàn)科室內(nèi),它已經(jīng)是一個(gè)業(yè)務(wù)內(nèi)容廣泛、擁有大量自動化精密儀器、由許多具備血液學(xué)基礎(chǔ)及臨床知識和嫻熟技術(shù)的人員組成的臨床專業(yè)科室。其業(yè)務(wù)內(nèi)容已擴(kuò)展到包括血細(xì)胞計(jì)數(shù)與形態(tài)學(xué)分析、紅細(xì)胞病理相關(guān)分析、白細(xì)胞病理相關(guān)分析以及血栓與止血相關(guān)分析等方面。
1 .血細(xì)胞計(jì)數(shù)及形態(tài)學(xué):
由于實(shí)驗(yàn)室檢測的自動化,以往的所謂“血常規(guī)”正被檢測參數(shù)更多的全血細(xì)胞計(jì)數(shù)( CBC )所取代。最新一代的血液分析儀,除了通常的 CBC 項(xiàng)目和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)以外,還可直接計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞,包括網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量( CHr )和表示網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟程度的多項(xiàng)指標(biāo)〔 2 〕;直接檢測有核紅細(xì)胞數(shù),并可從白細(xì)胞總數(shù)中自動扣除有核紅細(xì)胞,以及準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板總數(shù)和計(jì)數(shù)大型血小板數(shù)等〔 3 〕數(shù)十個(gè)參數(shù)。它不僅使十分繁瑣的紅細(xì)胞比積( Hct )測定和 MCV 、MCH 和 MCHC 計(jì)算成為“常規(guī)”項(xiàng)目,而且使過去表示紅細(xì)胞大小的分布曲線( Price-Jones 曲線)成為歷史。
因?yàn)楝F(xiàn)代血液分析儀作為常規(guī)檢測的紅細(xì)胞分布寬度( RDW ),比 Price-Jones 曲線反映紅細(xì)胞大小分布更為精確和直觀 〔 4 〕 。如果將 MCV 、MCH 、MCHC 、RDW 等 5 項(xiàng),結(jié)合網(wǎng)織紅細(xì)胞的多項(xiàng)參數(shù)綜合分析,必要時(shí)再輔以血片紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,有經(jīng)驗(yàn)的血液病醫(yī)師,基本上能較準(zhǔn)確地進(jìn)行各種貧血分類和鑒別診斷〔 5 〕。此外,這類儀器在白細(xì)胞分類檢測百分比時(shí),也報(bào)告絕對數(shù)。各種白細(xì)胞所占百分比是一個(gè)相對數(shù),其局限性顯而易見。當(dāng)前不少血液學(xué)專家提倡今后只檢測各種白細(xì)胞的絕對數(shù),因?yàn)槟遣攀欠从逞褐心骋患?xì)胞真實(shí)含量的科學(xué)指標(biāo)。
2 .紅細(xì)胞病理相關(guān)分析:
除了上述由血液分析儀給出的各項(xiàng)紅細(xì)胞指標(biāo)外,顯微鏡下的紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀測也十分重要,但是現(xiàn)今一般血液檢驗(yàn)者對此往往下夠重視。 Williams 血液學(xué)第 6 版將經(jīng)細(xì)胞形態(tài)分為 12 類,17 種,并介紹了每種形態(tài)與疾病的關(guān)聯(lián),可見這方面有多么豐富的內(nèi)容〔 6 〕。其他與紅細(xì)胞疾病相關(guān)的檢驗(yàn)還有:與遺傳有關(guān)的溶血性貧血和高鐵血紅蛋白血癥患者紅細(xì)胞內(nèi)各種酶的測定、異常血紅蛋白分析和紅細(xì)胞膜骨架蛋白等的檢測。以往分析這些蛋白質(zhì),多采用繁瑣的生物化學(xué)法,耗時(shí)、費(fèi)錢、技術(shù)要求高;雖然有一部分后來有了專用的商品試劑,但也難以推廣。由于這些蛋白質(zhì)的基因序列絕大部分已查明,目前生化方法正逐步被已相當(dāng)成熟的分子生物學(xué)方法(如 PCR 、核酸分子雜交,基因或蛋白質(zhì)芯片技術(shù)等)所取代〔 7-10 〕。
3 .白細(xì)胞病理相關(guān)分析:
當(dāng)前,用自動化血液分析儀進(jìn)行白細(xì)胞分類,雖然已經(jīng)取得長足進(jìn)步,但尚未達(dá)到完全取代手工鏡下分類的程度。它還不能準(zhǔn)確辨認(rèn)各類幼稚細(xì)胞、原始細(xì)胞以及諸如中性粒細(xì)胞的“毒性”變化和“不典型淋巴細(xì)胞”等,必要時(shí)還必須在顯微鏡下進(jìn)行識別。事實(shí)上,外周血白細(xì)胞的構(gòu)成十分復(fù)雜,單用一般染色和鏡檢也不可能達(dá)到準(zhǔn)確分類。
例如,看來似乎比較單一的外周血淋巴細(xì)胞,實(shí)際上是由 T 細(xì)胞、B 細(xì)胞和自然 傷( NK )細(xì)胞所構(gòu)成,其中 T 細(xì)胞還可再分成許多亞群〔 11 〕。這些細(xì)胞在顯微鏡下是無法區(qū)分的,必須用特異的抗淋巴細(xì)胞分化抗原群( CD )單克隆抗體,建立免疫方法(如流式細(xì)胞術(shù))進(jìn)行免疫表型檢測〔 12-14 〕。粒細(xì)胞、單核細(xì)胞甚至血小板等也是如此,這些分化抗原目前也采用 CD 編號。對臨床有重要意義,大小接近白細(xì)胞的巨大血小板和大小類似血小板的白細(xì)胞碎片和紅細(xì)胞碎片,在血液分析儀和肉眼鏡下往往也不易與血小板區(qū)分,只能用免疫學(xué)方法加以鑒別〔 15 〕。白血病類的“惡變”細(xì)胞,往往處于不同的分化階段,具有腫瘤細(xì)胞的特性,其形態(tài)變化很大,準(zhǔn)確識別有一定困難。早期的急性白血病 FAB 分類法,是建立在常規(guī)染色的形態(tài)學(xué)分析基礎(chǔ)上的,鑒別能力有限〔 16 〕。后來發(fā)現(xiàn)有些白血病有染色體畸變,例如慢性粒細(xì)胞白血病患者的第 9 號和 22 號染色體長臂發(fā)生易位,形成了有鑒別意義的所謂費(fèi)城染色體〔 Ph, 即 t(9:22) 〕。此后,在其他白血病相繼發(fā)現(xiàn)了不同類型的染色體易位等畸變,于是除了一般的細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)用于急性白血病鑒別以外, 又增加了細(xì)胞遺傳學(xué)( Cytogenetics, 即染色體分析),形成了所謂“MIC”鑒別模式。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,人們發(fā)現(xiàn) 9 號和 22 號染色體易位后,形成了一種 bcr/abl 融合基因。這樣就可以用分子生物學(xué)方法(如 PCR )或熒光原位雜交技術(shù)( FISH )加以檢測。因此,近年來有人提出,今后 FAB 分類將變?yōu)?MICM 模式。后一 M 即指分子生物學(xué)〔 17-19 〕。分子生物學(xué)方法較之染色體分析更為敏感,可發(fā)現(xiàn)以往難以發(fā)現(xiàn)和鑒定的特殊類型的易位;目前已有商品化試劑供應(yīng),操作相對較簡便,因此,近年來發(fā)展很快。不僅在融合基因方面,在器 移植前的淋巴細(xì)胞組織配型( HLA 鑒定)和特殊血型鑒定方面,近年來已越來越多地采用分子生物學(xué)方法〔 20 〕,這是整個(gè)檢驗(yàn)學(xué)當(dāng)前和今后重點(diǎn)發(fā)展方向。
4 .血栓與止血相關(guān)分析:
血栓與止血相關(guān)的檢驗(yàn),是近年來臨床血液學(xué)發(fā)展最快的領(lǐng)域。在 20 世紀(jì) 50 年代以前,國內(nèi)外的所謂“凝血試驗(yàn)”主要是出血性疾病和肝病的實(shí)驗(yàn)診斷項(xiàng)目,再就是用于外科手術(shù)前預(yù)測出血的項(xiàng)目。檢測項(xiàng)目少,技術(shù)落后。直到 20 世紀(jì) 90 年代,國內(nèi)還普遍使用精密度和準(zhǔn)確性都很差的玻片法凝血時(shí)間和 Duke 出血時(shí)間。近 10 年來,由于在凝血、抗凝和纖維蛋白溶解機(jī)制及其相互關(guān)系方面進(jìn)行了一系列基礎(chǔ)性研究,在止血與血栓形成理論和實(shí)踐上取得了重大突破。許多新的凝血、抗凝、纖溶因子抑制物的發(fā)現(xiàn)及檢測方法的建立、自動化儀器的普及和試劑的商品化開發(fā),帶動了血栓與止血檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展,成為臨床血液學(xué)檢驗(yàn)的新亮點(diǎn)。
目前,這一類檢驗(yàn)的工作量很大,在發(fā)達(dá)國家估計(jì)已占血液學(xué)檢驗(yàn)的 1/3 。中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)學(xué)分會與中華醫(yī)學(xué)會血液分會血栓與止血專業(yè)委員會在 1997 年煙臺會議上聯(lián)合提出了與國際接軌的 PT 、APTT 和纖維蛋白原測定標(biāo)準(zhǔn)化方案的建議;同時(shí)建議 汰玻片法凝血時(shí)間和 Duke 出血時(shí)間(需要時(shí)可用模板式出血時(shí)間法測定)〔 21-22 〕。
目前,我國一般中等以上醫(yī)院,大都開展“內(nèi)源”、“外源”和“共同”途徑凝血因子的過篩試驗(yàn)(如 PT 、APTT 、T.T 等)和常用凝血因子測定。在抗凝因子方面抗凝血酶Ⅲ,蛋白 C 、蛋白 S測定也日益普及。在纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物( FDP ),D-二聚體測定已相當(dāng)普及。在止血功能方面血小板計(jì)數(shù)、出血時(shí)間測定方法的改進(jìn)和規(guī)范化、血小板活化標(biāo)志物和 vWF 等的檢測,為臨床出血性疾病和血栓。ㄈ缧摹⒛X血管栓塞等)的診斷、判斷患者是否處于高凝狀態(tài)和抗凝治療的監(jiān)控等,提供了許多新的檢測指標(biāo)。與其他臨床檢驗(yàn)一樣,分子生物學(xué)方法在血栓與止血檢驗(yàn),特別是遺傳性出、凝血異常和血栓檢驗(yàn)工作者,近年來在這方面已經(jīng)取得不少重大成果,有的已達(dá)到國際先進(jìn)水平。
我國臨床血液學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測與建國初期相比,特別是改革開放以來,發(fā)生了翻天覆地的變化。上述僅為 3 個(gè)主要方面的概況,實(shí)際發(fā)展情況決不僅如此。例如血液學(xué)檢驗(yàn)規(guī)范化的工作模式和質(zhì)量控制體系已初步形成。在中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)分會和衛(wèi)生部臨檢中心多年的努力下。從標(biāo)本采集方法和容器(強(qiáng)調(diào)用靜脈血和用真空采血管)的規(guī)定、抗凝劑的選擇、儀器的校準(zhǔn)、方法的標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制都已有(或正在擬訂)統(tǒng)一的規(guī)定。有的已在《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》等刊物上發(fā)表,大部分地區(qū)的大醫(yī)院,臨床血液學(xué)檢驗(yàn)已達(dá)到或接近發(fā)達(dá)國家的同等到水平,但中西部有些欠發(fā)達(dá)地區(qū)還存在一定差距。相信隨著我國國 經(jīng)濟(jì)的跨越式發(fā)展,這種差距將會很快縮小以至消失。
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