
您的位置:首頁 > 技術(shù)文獻(xiàn) > 氣體分析/檢測儀 > 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br />(1)了解實(shí)驗(yàn)的常規(guī)儀器、設(shè)備、耗材。
(2)掌握本實(shí)驗(yàn)所用儀器的功能和使用方法。
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】
一、驗(yàn)室的常規(guī)儀器、設(shè)備
(一) 溫度控制系統(tǒng):
1. 冰箱: 根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要,必須具備不同控溫級別的冰箱,最常使用的有:4℃、-20℃、-80℃冰箱。
4℃適合儲存某些溶液、試劑、藥品等。
-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。
-80℃適合某些長期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。
0-10℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實(shí)驗(yàn)。
2.液氮罐:有些實(shí)驗(yàn)材料、某些器官組織、細(xì)胞株、菌株及純化的樣品等,要求速凍和長期保存在超低溫環(huán)境下,就需要一個(gè)液氮罐(-196℃)具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好地保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點(diǎn)。
3.培養(yǎng)箱:37℃恒溫箱用于細(xì)菌的固體培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。
CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細(xì)胞,可恒定地提供一定量的CO2(通常5%),用來維持培養(yǎng)液的酸度(pH值)。
37℃恒溫空氣搖床可進(jìn)行液體細(xì)菌的培養(yǎng)。
4. 水浴鍋:用于保溫。
25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗(yàn),各種生物化學(xué)酶反應(yīng)等試驗(yàn)的保溫。
25-100℃水浴箱用于常規(guī)試驗(yàn)。
5. 烘箱:主用于烘干實(shí)驗(yàn)器皿,有些需要溫度高些,有些需要溫度低些。用于RNA方面的實(shí)驗(yàn)用具,需要在250℃烤箱中烘干,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進(jìn)行烘干。
(二)水的凈化裝置:隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展,許多實(shí)驗(yàn)對水純度的要求越來越高。
1. 蒸餾水皿:單蒸水常難以滿足實(shí)驗(yàn)要求。雙蒸水、三蒸水配液,許多實(shí)驗(yàn)要去離子水。
多次蒸餾水可除去水中揮發(fā)性雜質(zhì),不能完全除去水中溶解的氣體雜質(zhì)(Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ))。
2. 離子交換器:去離子水—用離子交換法制取的水,稱去離子水。
去離子效果好,但不能除去水中的非離子型雜質(zhì),其中常含有微量的有機(jī)物(樹脂等)。
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3.超純水:用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水,磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測序、酶反應(yīng)、組織和細(xì)胞培養(yǎng)等。
(三)菌消毒設(shè)備:分子生物學(xué)所用大部分試劑,而且實(shí)驗(yàn)用具都應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌。。
1.蒸汽消毒鍋:用于小批量物品的隨時(shí)消毒。大批實(shí)驗(yàn)物品、試劑、培養(yǎng)基可使用大型消毒且定時(shí)進(jìn)行消毒
2. 紫外線:75%乙醇 、0.1%SDS(消毒劑)
一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。
紫外線照射使用方便,且很方便,但滅菌效果與距離有關(guān),且產(chǎn)生臭氧污染安全,用于無菌室,超凈臺和塑料用具的消毒。
3. 濾器濾膜:不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。
4. 煮沸消毒:主用于金屬器械和針急需時(shí)采用。
(四) 計(jì)量系統(tǒng):
1. 稱量系統(tǒng):(各種天平)臺秤、托盤天平、鈕力擺動(dòng)天平、
光電分子天平、精密電子分析天平
2. 液體體積的度量:精:量筒、移液管、微量取液器
粗:刻度試管、燒杯、錐形瓶
3. pH值測量:
pH計(jì):測定溶液中H+的直接電位的儀器,主要通過一對電極,在不同的pH溶液中產(chǎn)生不同的電動(dòng)勢用pH值表示出來。
pH試紙:只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計(jì)。而大部分試劑的配制要求嚴(yán)格的pH值,需精確度高(小數(shù)點(diǎn)后兩位)的pH計(jì)。
4. OD值測量:光密度、分光光度計(jì)是利用物質(zhì)在可見光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測量儀表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質(zhì)定量的方便指標(biāo)之一,通過所產(chǎn)生的單色光而測定某一溶液對該單色光的吸收值,利用它可進(jìn)行核酸溶液定量和純度的初步判斷。
(五)離心機(jī):離心技術(shù)是研究生物的結(jié)構(gòu)和功能中不可缺少的一種物理技術(shù)手段。因?yàn)楦鞣N物質(zhì)在沉淀系數(shù)、浮力、和質(zhì)量等方面有差異,可利用強(qiáng)大的離心力場,使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機(jī)?晒┥儆0.05ml到幾升的樣品離心之用。離心技術(shù)應(yīng)用廣泛,包括收集和分離細(xì)胞、細(xì)胞器和生物大分子等。據(jù)其轉(zhuǎn)速的不同,可分為以下幾種類型:
1. 普通離心機(jī):最大轉(zhuǎn)速6000 r/m ,最大離心力6000g
①醫(yī)用或臺式離心機(jī):是離心機(jī)中最簡單而廉價(jià)的,最常用于收集快速沉降系數(shù)的物質(zhì),如紅細(xì)胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細(xì)菌等。
②低速冷凍離心機(jī):主要用于細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞膜和細(xì)菌的沉淀和收集等。 2
2. 高速離心機(jī):最大轉(zhuǎn)速25000 r/m ,最大離心力89000g
有冷凍和常溫兩種,多用于制備和手收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。
3. 超速離心機(jī):最大轉(zhuǎn)速9000 r/m ,最大離心力694000g。
4. 臺式超速離心機(jī):最大轉(zhuǎn)速12000r/m ,最大離心力625000g。
(六)超凈工作臺:內(nèi)有紫外燈、照明燈、還應(yīng)有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設(shè)備,是一種提供局部潔凈度的設(shè)備。其原理是鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣,經(jīng)過低、中效的過濾器后,通過工作臺面,使實(shí)驗(yàn)操作區(qū)域成為無菌的環(huán)境。超凈臺按氣流方向的不同大致有幾種類型:
①側(cè)流式:凈化后氣流,從左側(cè)或右側(cè)通過工作臺面,流向?qū)?cè),或者從上往下或從下往上流向?qū)?cè),他們都能形成氣流屏障而保障臺面無菌。
缺點(diǎn):在凈化氣流和外邊氣體交界處,可因氣體的流向而出現(xiàn)負(fù)壓,使少量的未凈化氣體混入,而造成污染。
②外流式:氣流是面向操作人員的方向流動(dòng),從而保證外面氣體不能混入。
缺點(diǎn):在進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)時(shí),對操作人員不利,但可采用有機(jī)玻璃把上半部分遮擋起來,使氣流往下方流出。
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