摘要：

考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合，在0－1000ug/ml范圍內(nèi)，于波長595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，可用于蛋白質(zhì)含量的測定。考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速，結(jié)合產(chǎn)物在室溫下10分鐘內(nèi)較為穩(wěn)定，是一種較好的蛋白質(zhì)定量測定方法。

1. 實驗部分

1.1 儀器與試劑：

Labtech UV POWER紫外分光光度計；玻璃比色皿一套；考馬斯亮藍(lán)G250；

牛血清蛋白；超純水。

1.2 試液的制備：

牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000ug/ml）的制備 稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超純水溶解并定容。

考馬斯亮蘭G250試劑  稱取100mg考馬斯亮蘭G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀釋至1升。

2. 結(jié)果與討論

2.1 校正曲線的繪制

 準(zhǔn)確吸取1000ug/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分別加入到6只10ml試管中，然后用超純水補(bǔ)充到0.1ml，各試管分別加入5ml考馬斯亮蘭G250試劑，混合均勻后，即可依次在595nm處測定吸光度。以濃度

為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制校正曲線如下圖，校正曲線方程為A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

2.2  精密度

配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考馬斯亮蘭溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，得到吸光度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表1 精密度測定結(jié)果

2.3  穩(wěn)定性

取1mg/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液每十分鐘測定一次，50分鐘內(nèi)的吸光度變化如下表2。

表2 穩(wěn)定度測定結(jié)果

3. 結(jié)論

     該方法測定快速、簡便，干擾物少，是目前靈敏度較高的蛋白質(zhì)含量測定的紫外分光光度法。v