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蛋白組學(xué)研究是即基因組學(xué)研究后的生命科學(xué)發(fā)展的一個(gè)大方向之一。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能最終直接影響著生命活動(dòng)的變化,基因轉(zhuǎn)錄水平的研究只能在一定程度上反映基因表達(dá)產(chǎn)物的變化,而真正發(fā)揮功能的蛋白要經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯調(diào)控以及翻譯后加工等許多步驟和調(diào)控才能形成,因而對(duì)蛋白質(zhì)的直接研究才能真實(shí)的解釋各種生命現(xiàn)象。但是目前研究蛋白質(zhì)的手段和方法還沒有很大的發(fā)展,所以尋找有效、快捷的蛋白分析技術(shù)成為了至關(guān)重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。
蛋白芯片技術(shù)的出現(xiàn)給蛋白組學(xué)研究帶來(lái)新思路。蛋白組學(xué)研究中一個(gè)主要的內(nèi)容就是要研究在不同生理狀態(tài)或病理狀態(tài)下蛋白水平的量變,微型化,集成化,高通量化的抗體芯片就是一個(gè)非常好的研究工具,它也是蛋白芯片中發(fā)展最快的芯片,而且在技術(shù)上已經(jīng)日益成熟。這些抗體芯片有的已經(jīng)在向臨床應(yīng)用上發(fā)展,比如腫瘤標(biāo)志物抗體芯片等,還有很多已經(jīng)用在研究的各個(gè)領(lǐng)域里。
第一張商品化的抗體芯片是由美國(guó)BD Clontech公司推出的。這是一張用于研究的抗體芯片,芯片上排列了378種已知蛋白的單抗(Ab Microarray 380,目錄號(hào) K1847-1),這些單抗對(duì)應(yīng)的蛋白都是細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能上十分重要的蛋白,涉及信號(hào)傳導(dǎo)、腫瘤、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞凋亡和神經(jīng)生物學(xué)等廣泛的領(lǐng)域。通過這張芯片,我們?cè)谝淮螌?shí)驗(yàn)中就能夠比較幾百種蛋白的表達(dá)變化。
Ab Microarray 380上抗體是經(jīng)過精心挑選的,這些抗體不僅可以識(shí)別人源的蛋白,對(duì)小鼠和大鼠樣品同樣有效。另外,每個(gè)抗體的結(jié)合親和力都經(jīng)過了實(shí)驗(yàn)測(cè)定,從多種抗體來(lái)源的克隆中篩選出反應(yīng)特異性好,交叉反應(yīng)程度小,信號(hào)明顯的抗體,并且還要保證信號(hào)與抗原濃度有著良好的線性關(guān)系。優(yōu)化的抗體探針才可以保證反應(yīng)的特異和靈敏(可檢測(cè)20pg/ml的抗原濃度)。芯片的檢測(cè)是用熒光報(bào)告分子,常用的熒光掃描儀都能夠完成。
第一代的蛋白芯片和DNA芯片一樣是作為一種定性分析的工具,可用于分析樣品之間相關(guān)蛋白的相對(duì)表達(dá)豐度;還可以作為DNA芯片的補(bǔ)充,用于研究蛋白和基因表達(dá)之間的關(guān)系。
操作流程
Ab Microarray 380抗體芯片并不要求特殊的實(shí)驗(yàn)操作,只要一般常規(guī)的操作就可以完成以往極為復(fù)雜耗時(shí)的工作。整個(gè)操作流程包括:從50~200mg組織或細(xì)胞、體液中進(jìn)行蛋白質(zhì)抽提——用Cy5和Cy3兩種不同顏色的熒光分子分別標(biāo)記兩個(gè)樣品——洗去多余的標(biāo)記分子——與芯片雜交孵育——掃描分析結(jié)果。整個(gè)過程從樣品制備到結(jié)果分析只要一天即可完成,你只要準(zhǔn)備好樣品、熒光染料、脫鹽純化柱(處理體液樣品時(shí)用)和熒光掃描儀,其他的試劑全部由試劑盒提供。
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