彩色免疫金銀法（colouredIGSS簡稱CIGSS）是在IGSS基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新方法。其基本原理與彩色顯影相似。IGSS方法染色在抗原位點處生成銀顆粒經(jīng)鐵氰化鉀與溴化鉀的作用即被氧化成溴化銀，后者與彩色顯影劑相接觸立即被還原成金屬銀，而彩色顯影劑本身則被氧化，其氧化產(chǎn)物使彩色成色劑由無色變成有色的染料并沉積在銀顆粒的部位，金屬銀變成了銀離子。由于染料只能通過彩色顯影劑沉積在有銀的部位，所以不與組織發(fā)生非特異性吸附。

以彩色顯影人肝組織內(nèi)HBsAg的操作過程為例：

（1）脫蠟至水。

（2）0.1%胰蛋白酶37℃10min。

（3）Lugol‘s，碘液5min。

（4）5%硫代硫酸鈉1min。

（5）用0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，兩次。

（6）1%卵白蛋白封閉10min。

（7）馬抗HBsAg抗體1：1000稀釋，37℃1~2h或4℃過夜。

（8）0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，兩次。

（9）1%卵白蛋白封閉10min。

（10）PAg1：40，37℃45min。

（11）0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，兩次。

（12）雙蒸水洗5min，兩次。

（13）物理顯影

（14）自來水沖洗。

（15）雙蒸水洗5min，兩次。

（16）2%鐵氰化鉀和1%溴化鉀，1min。

（17）雙蒸水沖洗。

（18）彩色顯影（ -萘酚或菲尼酮）2min。

（19）雙蒸水沖洗。

（20）2%鐵氰化鉀和1%溴化鉀，1min。

（21）2%鐵硫代酸鈉和1%亞硫酸鈉，5min。

（22）流水沖洗。

（23）如需要可用蘇木素或核紅復(fù)染。

（24）緩沖甘油封固，觀察。

結(jié)果：CIGSS的優(yōu)點：①陽性結(jié)果比黑色更鮮明；②可以使弱信號得到放大；③消除IGSS背景染色；④信號/背景比值高；⑤是開展免疫金銀雙標(biāo)技術(shù)的新途徑.光鏡下見HBsAg陽性物質(zhì)呈鮮艷的藍(lán)色（ -萘酚為成色劑）或呈綠色（菲尼酮為成色劑）。背景干凈，陽性結(jié)果清楚。

彩色顯影背景過染的處理方法

彩色免疫金銀法，在膠體金技術(shù)中是一個很大的突破，它的優(yōu)點是結(jié)果鮮明，對比度好，但是在彩色顯影過程中時間過長，背景可有一些著色，彩色顯影的時間控制很重要。一旦過染可用以下方法處理。

（1）純酒精滴到切片上3~5s，立即沖掉，水洗，充分地把酒精洗掉，如果洗不徹底，造成陽性結(jié)果脫色。

（2）75%的酒精滴到切片上1min，立即沖掉，脫色不能時間過長，過長后陽性結(jié)果全部脫掉。