紫外-可見分光光度計的應(yīng)用-用雙波長法測定混濁樣品 由于一些材料成分復(fù)雜和樣品混濁，給分光光度法帶來了困難。為此，或是改變材料本身，如從制樣考慮，降低懸浮液的混濁度；或從改進(jìn)儀器著手，如用積分球的辦法收集散射光；或用乳白玻璃法減輕散射的影響，但都不能從根本上解決問題。1951年B.Chance及其同事為了研究細(xì)胞色素，對儀器和測定技術(shù)作了進(jìn)一步的改進(jìn)，摸索了雙波長法，試制了第一臺雙波長分光光度計。以后，1995年Bulter和Bruit教授用此法來測定水果成熟的程度。雙波長法解決了由于樣品混濁而引起的測定誤差。同時，這種新的設(shè)計還帶來了許多優(yōu)點。 由于樣品混濁產(chǎn)生的散射和非特征吸收信號常常干擾欲測的特征吸收信號，致使測定失敗。尤其在進(jìn)行動力學(xué)測量中發(fā)生變化，如中間產(chǎn)物（它們可能就是欲測的組分）存在的時間短，且散射的情況可能在測定過程中發(fā)生變化，這就更增加了測量的困難。為了除去這些非特征信號，從理論上說可以有三種辦法：電學(xué)法、雙光束法和雙波長法。前二者都有不可克服的困難。雙波長法是不用參考溶液，是兩個不同波長的單色光交替通過代測的混濁樣品，然后對通過此樣品的兩個波長的吸收信號進(jìn)行測量并加以比較。 如把一個波長λe選在欲測組分吸收帶的峰值上，另一波長λR選在欲測組分吸收帶的凹谷上，那末這兩個波長的光束通過樣品后所引起的吸收信號差就應(yīng)該僅僅是欲測的特征信號了。B.Chance根據(jù)這一設(shè)想設(shè)計了世界上第一臺雙波長分光光度計。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，雙波分光光度計已越來越完善了。