摘要：目的研究可見(jiàn)光及紫外分光光度法測(cè)定丁香總黃酮含量的方法。方法可見(jiàn)光分光光度法是以蘆丁為參照品，硝酸鋁作顯色劑，在510 nm波長(zhǎng)測(cè)定總黃酮含量。紫外分光光度法是以蘆丁為參照品，在359 nm波長(zhǎng)測(cè)定總黃酮含量。結(jié)果可見(jiàn)光法平均回收率是99.46% , 紫外光法是99.13%。RSD分別是1.15 % 和0.90%。結(jié)論 紫外分光光度法是一種較理想的測(cè)定方法。

　　關(guān)鍵詞：丁香； 總黃酮； 可見(jiàn)光分光光度法； 紫外分光光度法

　　丁香Eugenia caryophyllata Thunb.又名丁子香、支解香、公丁香。丁香分布于馬來(lái)群島及非洲，我國(guó)廣東、廣西等地均有栽培。丁香中含有酚類、β石竹烯、甲基正戊基酮、水楊酸甲酯和黃酮等物質(zhì)。丁香性溫，味辛, 有溫中、曖腎、降逆的功能 ［1］。目前報(bào)道的測(cè)定植物中黃酮含量的方法主要是可見(jiàn)光分光光度法［2］，但可見(jiàn)光及紫外光分光光度法測(cè)定丁香總黃酮含量的方法未見(jiàn)報(bào)道。本文采用可見(jiàn)光與紫外光分光光度法測(cè)定丁香中總黃酮含量，并對(duì)兩種方法進(jìn)行了比較，擬尋找一種準(zhǔn)確而簡(jiǎn)便的測(cè)定丁香中黃酮含量的方法。

　　1 儀器與試劑

　　1.1 儀器上�；萜�6010型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；上海二分7230G可見(jiàn)光分光光度計(jì)；北京賽多利斯電子分析天平；索氏抽提器；PHILIPS7120S粉碎機(jī)。

　　1.2 試劑與樣品蘆丁對(duì)照品從廣州中醫(yī)藥大學(xué)藥物化學(xué)研究所購(gòu)買,蘆丁含量≥98%；其它試劑均為分析純。丁香樣品購(gòu)于廣州，經(jīng)粉碎后過(guò)60目篩，在60 ℃烘箱干燥6 h后冷卻備用。

　　2 方法

　　2.1 樣品處理精確稱取丁香粉末1.000 0 g，在索氏抽提器中經(jīng)石油醚脫脂到無(wú)色，放冷后轉(zhuǎn)出石油醚，加入80 ml無(wú)水甲醇，抽提至無(wú)色。提取液全部轉(zhuǎn)移到100 ml容量瓶，用無(wú)水甲醇定容作為試液待用。

　　2.2 可見(jiàn)光分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品250 mg, 用無(wú)水甲醇溶解,轉(zhuǎn)移入250 ml容量瓶中, 用無(wú)水甲醇定容，搖勻．精確移取5.00 ml至50 ml容量瓶中，用無(wú)水甲醇定容，搖勻。此蘆丁對(duì)照品溶液濃度為0.1 mg?ml-1。準(zhǔn)確吸取0.1 mg?ml-1蘆丁對(duì)照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml,分別置25 ml容量瓶中,各加50 %乙醇至6 ml，分別加5 %亞硝酸鈉溶液1.00 ml，搖勻,放置6 min后分別加10%硝酸鋁溶液1.00 ml，搖勻,放置6 min,再分別加1 %氫氧化鈉溶液10.00 ml，再用50 %乙醇定容，搖勻，放置15 min后,以空白溶液為參比，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)吸光度，得回歸方程。

　　2.3 可見(jiàn)光分光光度法回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取5份已知總黃酮含量的丁香粉末1.000 0 g,加入一定量的蘆丁對(duì)照品,按照2.1所述制得樣品液,按照2.2所述顯色并測(cè)定吸光度, 由回歸方程計(jì)算總黃酮含量,按回收率＝（實(shí)測(cè)值－樣品所含的總黃酮）/加入的蘆丁×100 %。

　　2.4 可見(jiàn)光分光光度法樣品的總黃酮含量測(cè)定分別準(zhǔn)確吸取1.00 ml試液置25 ml容量瓶中, 按照2.2所述顯色并測(cè)定吸光度，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A,由回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量。

　　2.5 紫外光分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品96.4 mg， 用無(wú)水甲醇溶解，轉(zhuǎn)移入100 ml容量瓶中, 用無(wú)水甲醇定容,搖勻．精確移取10.00～100 ml容量瓶中，用無(wú)水甲醇定容，搖勻。此蘆丁對(duì)照品溶液濃度為0.096 4 mg?ml-1。 準(zhǔn)確吸取濃度0.096 4 mg?ml-1蘆丁對(duì)照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，6.00 ml， 分別置25 ml容量瓶中, 各加無(wú)水甲醇定容，在359 nm處測(cè)吸光度，得回歸方程。

　　2.6 紫外光分光光度法回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取5份已知總黃酮含量的丁香粉末1.000 0 g,加入一定量的蘆丁對(duì)照品,按照2.1所述制得樣品液,用無(wú)水甲醇稀釋樣品液，在359 nm處測(cè)吸光度，由回歸方程計(jì)算總黃酮含量,按回收率＝（實(shí)測(cè)值－樣品所含的總黃酮）/加入的蘆丁×100 %。

　　2.7 紫外光分光光度法樣品的總黃酮含量測(cè)定分別準(zhǔn)確吸取1.00 ml試液置25 ml容量瓶中, 用無(wú)水甲醇稀釋定容，在359 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A，由回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量。

　　3 結(jié)果

　　3.1 可見(jiàn)光分光光度法將配制好的不同濃度的蘆丁對(duì)照品溶液在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A，得回歸方程為：A=-0.011 5 0.020 62C （A為吸光度，C為濃度mg?L-1），相關(guān)系數(shù)r=0.999 7。這表明蘆丁濃度在4 ～24 mg/L范圍內(nèi)線性良好。

　　3.2 紫外光分光光度法將配制好的不同濃度的蘆丁對(duì)照品溶液在359 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A，得回歸方程為：A=0.000 405 4 0.027 18C（A為吸光度，C為濃度mg?L-1），相關(guān)系數(shù)r=0.999 7。這表明蘆丁濃度在4～24 mg/L范圍內(nèi)線性良好。

　　3.3 樣品的總黃酮含量測(cè)定 黃酮類化合物具有特定的紫外吸收帶，其結(jié)構(gòu)中的肉桂酰環(huán)產(chǎn)生的Ⅰ帶在300～400 nm內(nèi)，由苯甲酰環(huán)產(chǎn)生的Ⅱ帶在240～285 nm內(nèi)，不同的黃酮在這兩個(gè)吸收帶的吸收強(qiáng)度不同［3］。含黃酮類化合物的原料經(jīng)一定的提取純化后，可直接于最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，以蘆丁為對(duì)照品對(duì)照計(jì)算其含量［4］。本實(shí)驗(yàn)選擇蘆丁在Ⅰ帶的最大吸收波長(zhǎng)359 nm作為紫外光分光光度法的測(cè)量波長(zhǎng)。取不同產(chǎn)地的丁香樣品, 分別用可見(jiàn)光分光光度法和紫外光分光光度法對(duì)每個(gè)樣品平行測(cè)定3次,RSD=1.09 %,各個(gè)樣品的總黃酮含量結(jié)果見(jiàn)表1。

　　表1 不同產(chǎn)地的丁香樣品的總黃酮含量測(cè)定結(jié)果（略）

　　從表1可見(jiàn)，不同產(chǎn)地的丁香全草的總黃酮含量有一定差異，其中以廣東丁香2號(hào)黃酮含量最高,而廣西丁香1號(hào)黃酮含量最低。用可見(jiàn)光分光光度法測(cè)得的總黃酮含量總是比用紫外光分光光度法測(cè)得的總黃酮含量要稍高，這可能因?yàn)榭梢?jiàn)光分光光度法是在強(qiáng)堿性溶液與鋁離子反應(yīng)后顯色, 而丁香又含酚類,酚羥基在該條件下也能夠與鋁離子結(jié)合,在510 nm處也被吸收,這樣就導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高［5］。

　　3.4 回收率實(shí)驗(yàn) 把一定量的蘆丁對(duì)照品加入已知總黃酮含量的廣東丁香2號(hào)中做回收率實(shí)驗(yàn)，由表2可見(jiàn)，回收率范圍符合定量分析要求。

　　表2 廣東丁香2號(hào)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)（略）

　　4 結(jié)論

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，可見(jiàn)光分光光度法和紫外光分光光度法兩種方法測(cè)定丁香總黃酮含量都有較好的線性關(guān)系。紫外光分光光度法能直接測(cè)定黃酮的含量，不需用硝酸鋁顯色，從而能夠避免丁香中酚羥基的干擾，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，是測(cè)定丁香總黃酮含量較佳的方法。