一、高效反相液相色譜柱
　　
　　以C18為代表的高效反相液相色譜柱一直被描述為藥物發(fā)現(xiàn)、開發(fā)、方法驗(yàn)證（validation）的心臟!高效反相液相色譜柱也極其廣泛應(yīng)用在藥物代謝及動力學(xué)、生命科學(xué)、醫(yī)療健康、生物分析檢測、毒品和興奮劑檢測、食品安全分析、環(huán)境分析、軍事、國土安全等領(lǐng)域!高效反相液相色譜制備柱也是最重要的分離純化技術(shù)之一!
　　
　　無論是過去，現(xiàn)在和可預(yù)見的未來,以球形B型硅膠（5um或3um）為材料骨架的高效反相液相色譜柱在實(shí)際應(yīng)用中永遠(yuǎn)占有統(tǒng)治地位!常規(guī)HPLC方法的開發(fā)幾乎總是從C18作為出發(fā)點(diǎn)，反相色譜占了80%以上的應(yīng)用。
　　
　　過去數(shù)十年來,無數(shù)努力集注于:
　　
　　1）改善硅膠的品質(zhì),優(yōu)化鍵合化學(xué);2）開發(fā)新穎的材料骨架替代硅膠。
　　
　　十多年前,使用有機(jī)硅材料取代無機(jī)硅材料作為起始原料生產(chǎn)球形硅膠代表一個(gè)劃時(shí)代的革命!生產(chǎn)的球形硅膠命名為B型球形硅膠。無機(jī)A型硅膠重金屬含量很高,硅膠表面若干位置嚴(yán)重酸化及螯合效應(yīng)等導(dǎo)致許多堿性化合物回收率低。球形B型硅膠重金屬含量很低,在非常大的程度上消除了A型無機(jī)硅膠表面若干位置嚴(yán)重酸化及螯合效應(yīng)等問題。用B型球形硅膠合成高效液相色譜填料,導(dǎo)致高效液相色譜柱產(chǎn)品質(zhì)量有質(zhì)的飛躍!
　　
　　然而，另一方面，基于客戶的大量反饋和我們對幾乎所有色譜廠商產(chǎn)品的評估,我們相信鍵合化學(xué)問題沒有獲得很好的解決。具體體現(xiàn)在:
　　
　　（1）“純粹”反相機(jī)理的鍵合相例如C18和C8市場上仍然是單功能，三功能和聚合物鍵合相"魚目混雜"。
　　
　�。�2）鍵合相封端問題沒有獲得很好的解決,一直是困擾色譜領(lǐng)域最大的問題!迄今為止全部的嘗試只獲得有限的成功。
　　
　�。�3）極性嵌入式（Polarembedded）鍵合相
　　
　　極性嵌入式（Polarembedded）鍵合相是C18高效反相液相色譜"衛(wèi)星群"中最重要的產(chǎn)品,是C18和C8鍵合相最重要的補(bǔ)充。
　　
　　極性嵌入式（Polarembedded）鍵合相起源于SupelcoABZ。SupelcoABZ的鍵合方法是用aminopropyl鍵合相和長鏈羧酸縮合反應(yīng)形成一個(gè)C16酰胺。
　　
　　那么市場上的極性嵌入式（Polarembedded）鍵合相群的主要問題是什么?極性嵌入式鍵合相和所謂的水相C18主要問題是鍵合相泄漏,鍵合相不穩(wěn)定等。兩者之間的內(nèi)在差異是:極性嵌入式鍵合相鍵合相泄漏和鍵合相不穩(wěn)定等問題能夠獲得很好的解決,但使用極性硅烷試劑封端的所謂的水相C18鍵合相鍵合相泄漏和鍵合相不穩(wěn)定等問題是不可逆轉(zhuǎn)的。
　　
　　在類似C18鏈長度的硅烷試劑中嵌入極性酰胺或酰酯,使得鍵合相親水,在100%水相條件下穩(wěn)定。但按照類似C18的鍵合化學(xué),鍵合覆蓋率低,鍵合相不穩(wěn)定。
　　
　　Chrom-MatrixInnovationTMPEG鍵合相是非常極性的產(chǎn)品,但測試結(jié)果表明:PEG鍵合相非常穩(wěn)定,在LC-MS測試中沒有檢測到泄漏。這一成功和我們在膠體與界面科學(xué)領(lǐng)域的長期經(jīng)驗(yàn)幫助我們成功開發(fā)了新型催化條件下新的鍵合化學(xué)。加上超臨界流體技術(shù)封端,Chrom-MatrixInnovationTM極性酰胺或酰酯鍵合相比那么市場上的極性嵌入式（Polarembedded）鍵合相群穩(wěn)定得多。色譜柱產(chǎn)品質(zhì)量和壽命有質(zhì)的飛躍!即使這樣,LC-MS測試顯示:Chrom-MatrixInnovationTM極性酰胺或酰酯鍵合相仍然有非常低的泄漏。
　　
　�。�4）無泄漏低孔和高比表面積C18鍵合相等是小分子化合物分離純化的終端保證!
　　
　　制備型高效反相液相色譜柱,制備型高效正相液相色譜柱,制備型高效離子交換色譜柱和對應(yīng)的閃光色譜（flashchromatograpy）是小分子化合物分離純化最重要的終端保證!
　　
　　但是市場上大多數(shù)色譜產(chǎn)品和閃光色譜（flashchromatograpy）鍵合相有明顯的泄漏。盡管泄漏在紫外可見檢測器中是看不見的,LC-MS信號非常明顯!最重要的是泄漏的硅烷實(shí)實(shí)在在洗脫到顧客的終端純化產(chǎn)品中,而且沒有考慮在內(nèi)。
　　
　　Chrom-Matrix公司成功地解決了上述所有問題!InnovationTM所有反相高效液相色譜產(chǎn)品都使用B型球形硅膠合成,使用最優(yōu)化個(gè)性化合成工藝,使用超臨界流體封端,使用LC-MS/MS和表面電荷滴定等多種獨(dú)特技術(shù)配合多種色譜測試保證產(chǎn)品的品質(zhì)和批次重現(xiàn)性。其中大部分產(chǎn)品LC-MS/MS測試無泄漏,極性嵌入式（Polarembedded）鍵合相非常低的泄漏。
　　
　　二、高效正相液相色譜柱
　　
　　正相液相色譜是最早的色譜模式。直到現(xiàn)在,合成后通過硅膠柱做進(jìn)一步純化仍然是有機(jī)化學(xué)家日常工作的一個(gè)重要組成部分。在理論上,幾乎所有的溶于正己烷，乙酸乙酯或異丙醇的有機(jī)化合物都可以用高效正相液相色譜分析。但在實(shí)際應(yīng)用中，高效正相液相色譜的應(yīng)用比高效反相色譜少得多。這是因?yàn)檎�己�?乙酸乙酯沒有像水，甲醇或乙腈那樣受歡迎。此外,A型硅膠正相液相色譜給客戶一個(gè)慣性思維:高效正相液相色譜的平衡時(shí)間很長。
　　
　　事實(shí)上,高效正相液相色譜在制備規(guī)模的色譜純化中一直發(fā)揮了重要作用。這是因?yàn)?
　　
　　（1）高效正相液相色譜比高效反相色譜柱壓低得多。
　　
　�。�2）高效正相液相色譜用的溶劑例如正己烷,乙酸乙酯很容易通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去。
　　
　　（3）吡咯等蒸發(fā)性溶劑徹底改善了堿性有機(jī)化合物在B型球形硅膠,Diol和PEG正相液相色譜柱上的峰形。
　　
　　此外,不管制備規(guī)模或分析測試,
　　
　�。�1）結(jié)構(gòu)異構(gòu)體分離分析必須使用正相液相色譜或超臨界流體色譜。
　　
　�。�2）環(huán)境中腐殖酸的結(jié)構(gòu)鑒定必須使用甲基化或硅烷化消除小分子聚集,然后使用正相液相色譜或超臨界流體色譜。這種小分子聚集的自然現(xiàn)象一定相當(dāng)廣泛。
　　
　　PEG正相液相色譜鍵合相等將讓客戶重新評估高效正相液相色譜的價(jià)值。
　　
　　三、高效親水液相色譜柱
　　
　　高效親水液相色譜是一個(gè)介于正相和反相高效液相色譜之間的運(yùn)作模式。這個(gè)模式最早來自NH2色譜柱的糖分析應(yīng)用。在此之后，逐步在Diol,硅膠和親水性高分子鍵合相找到了一些有價(jià)值的應(yīng)用。
　　
　　近年來，高效親水液相色譜成為比較流行的色譜的運(yùn)作模式,主要是因?yàn)橛H水性化合物有良好的保留和高效親水液相色譜在LC-MS/MS中的應(yīng)用。
　　
　　盡管如此，迄今為止沒有權(quán)威的論文,評論和教科書揭示了高效親水液相色譜真正的價(jià)值和局限性。
　　
　　近年來，我們幫助客戶采用高效親水液相色譜的運(yùn)作模式成功地開發(fā)和驗(yàn)證了數(shù)以百計(jì)的HPLC和LC-MS/MS應(yīng)用。我們總結(jié)出:
　　
　�。�1）高效親水液相色譜是LC-MS/MS應(yīng)用的第一選擇。請參閱我們的LC-MS/MS產(chǎn)品手冊應(yīng)用案例。
　　
　�。�2）除了InnovationTMTX多功能色譜柱,所有親水液相色譜僅可用于分析，而不是制備規(guī)模的分離。
　　
　　（3）高效親水液相色譜流動相A是乙腈（pH值用少量的甲酸或其他調(diào)節(jié)）,流動相B是水（pH值用少量的甲酸或其他調(diào)節(jié)）。化合物洗脫秩序類似于正相液相色譜,疏水性化合物首先洗脫,然后是親水化合物。流動相A一般不使用甲醇或丙酮或其他有機(jī)溶劑。
　　
　　（4）進(jìn)樣體積太大會導(dǎo)致一些峰值扭曲或分裂。柱承載能力通常是非常小的。
　　
　�。�5）InnovationTMTX,HPAmide,Silica三種高效親水液相色譜覆蓋99％以上的應(yīng)用,NH2色譜柱用于簡單糖分析應(yīng)用。
　　
　　（6）除了InnovationTMTX多功能色譜柱,所有親水高效液相色譜柱柱效不如正相和反相高效液相色譜。
　　
　　四、高效強(qiáng)陽離子交換液相色譜柱
　　
　　離子交換液相色譜是生物分離最常見最有用的一種色譜模式。另一方面，小分子分離分析極少使用高效離子交換液相色譜。這是因?yàn)?
　　
　�。�1）新穎的反相和多功能鍵合相例如InnovationTMPolar-EmbeddedStableAmide和TX連續(xù)出現(xiàn),在很大的程度上補(bǔ)償了常規(guī)C18鍵合相的缺點(diǎn)。C18,C8鍵合相也有重大進(jìn)展。高效親水液相色譜柱也覆蓋了許多分析應(yīng)用。
　　
　　（2）相比之下,硅膠基質(zhì)的高效離子交換鍵合相近幾十年來產(chǎn)品質(zhì)量沒有取得質(zhì)的突破。硅膠基質(zhì)的高效離子交換鍵合相柱壽命普遍短,疏水相互作用明顯。
　　
　�。�3）聚合物基質(zhì)的高效離子交換鍵合相在生物分析上面的應(yīng)用比較廣泛,但其柱效過低，表面積太小，對小分子分離分析難有吸引力。
　　
　　科學(xué)發(fā)明往往來自現(xiàn)實(shí)世界的挑戰(zhàn)!在對海洋毒素,微生物代謝產(chǎn)物和天然植物（包括中草藥）有效成分的分離純化過程中,我們深深感到高質(zhì)量的硅膠基質(zhì)的高效離子交換鍵合相是必不可少的!因此，我們開發(fā)了硅膠基質(zhì)的SCX,WCX,DEAE和SAX高效離子交換鍵合相。
　　
　　五、InnovationTM高效多功能液相色譜柱
　　
　　我們介紹四種高效多功能液相色譜柱:
　　
　�。�1）InnovationTMTX毒品分析HPLC柱
　　
　　InnovationTMTX毒品分析HPLC柱是實(shí)際應(yīng)用中最有價(jià)值的一種色譜柱。由于其在毒品分析上出色的表現(xiàn),DEA專家稱它毒品分析HPLC柱。InnovationTMTX是一個(gè)多功能色譜柱,具有反相,弱陽離子離子交換,親水等作用,能夠使用在100%水相或100%有機(jī)相。由于它的弱陽離子離子交換機(jī)理,InnovationTMTX對堿性化合物的分離效果是所有色譜柱中最好的。它對堿性化合物有完美的峰形。
　　
　　它的絕對柱效和反相色譜分析柱相同的，甚至優(yōu)于反相,遠(yuǎn)勝傳統(tǒng)的親水色譜分析柱。
　　
　　（2）InnovationTMDNPHHPLC柱
　　
　　InnovationTMDNPHHPLC柱主要用于環(huán)境中醛和酮DNPH衍生物分析。在特定的DNPH衍生物分析應(yīng)用中,任何其他色譜柱沒有它優(yōu)越的選擇性。
　　
　�。�3）InnovationTMPAHHPLC柱
　　
　　（4）血漿，血清直接進(jìn)樣的InnovationTMPEG色譜柱
　　
　　限制進(jìn)入鍵合相（Restrictedaccessmedia）最早由Merck公司發(fā)明。一個(gè)典型的方法是首先制造Diol鍵合相,然后通過酰酯或酰胺反應(yīng)嵌入疏水鏈。硅膠外表面的酰酯或酰胺鏈?zhǔn)褂妹盖袛嚅_。但酶不能擴(kuò)散到內(nèi)表面。由此外表面親水,內(nèi)表面疏水。血漿，血清,尿樣可以直接進(jìn)樣。蛋白質(zhì)等生物流體通過親水外表面時(shí)沒有保留,小分子化合物可以擴(kuò)散到內(nèi)表面通過反相保留最后洗脫。限制進(jìn)入鍵合相（Restrictedaccessmedia）在學(xué)術(shù)領(lǐng)域比較歡迎,但隨著固相萃取產(chǎn)品的發(fā)展,在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用相當(dāng)少。
　　
　　但我們最后發(fā)現(xiàn),血漿，血清,尿樣可以直接進(jìn)樣的限制進(jìn)入鍵合（Restrictedaccessmedia）,尤其是InnovationTMPEG色譜柱在藥物代謝領(lǐng)域具有獨(dú)特價(jià)值。藥物代謝研究,尤其是全盲條件下的早期藥物代謝研究,追求絕對回收率!一種藥物代謝之后,打破成許多小分子化合物。全盲條件下不可能使用固相萃取回收全部小分子代謝產(chǎn)物。最理想的方法是,血漿，血清,尿樣可以直接進(jìn)樣,每毫升收集液使用14C同位素檢測,然后建立一個(gè)明確的代謝概況。
　　
　　InnovationTMPEG色譜柱是一種多功能色譜柱。它是最好的正相色譜柱!同時(shí)，使用乙醇取代儲存溶劑后,它能夠被用來作為反相讓血漿，血清,尿樣可以直接進(jìn)樣。