采用高效液相色譜（HPLC）法測定該制劑中綠原酸的含量,方法簡便、快速,可用于熱毒平顆粒的質(zhì)量控制。
　　
　　熱毒平顆粒由金銀花、生石膏、玄參、地黃等中藥制成,具有清熱解毒之功效,用于治療流感、上呼吸道感染及各種發(fā)熱等癥[1]。綠原酸為該制劑主藥金銀花的主要有效成分,具有明顯的抗炎、殺菌、抗病毒的作用。
　　
　　1儀器與試藥
　　
　　SP8800高效液相色譜儀（美國光譜物理公司）；分析之星色譜工作站；紫外FOCUS檢測器。綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號110753-200413）；熱毒平顆粒（天津中新藥業(yè)隆順榕制藥廠,批號0602001、0602002、0602003）。乙腈為色譜純,磷酸為分析純,水為純凈水。
　　
　　2方法與結(jié)果
　　
　　2.1色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗
　　
　　色譜柱：YMC公司ODS-A柱（150mm×4.6mm,5μm）；流動相：乙腈-0.2%磷酸水溶液（10∶90）；流速：1.0mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：327nm；進樣量：10μL。理論板數(shù)按綠原酸峰計應(yīng)不低于3000,分離度＞1.5。色譜圖見圖1。
　　
　　2.2溶液的制備
　　
　　2.2.1對照品溶液的制備
　　
　　精密稱取綠原酸對照品4.24mg,置于50mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,配成濃度為0.0848mg/mL的對照品儲備溶液,10℃以下保存。再精密量取4mL置10mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀釋至刻度,制成含綠原酸0.0339mg/mL的對照品溶液。
　　
　　2.2.2供試品溶液的制備
　　
　　取本品7g,精密稱定,研細,混勻,取約0.5g,精密稱定,放入具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇25mL,稱定重量,密塞,超聲處理（功率250W,頻率33kHz）30min,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補足減失的重量,搖勻,以0.45μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
　　
　　2.2.3陰性對照溶液的制備
　　
　　按處方取除金銀花的各味藥材,按制法制得樣品,再按“2.2.2”項下方法,制得陰性對照溶液。
　　
　　2.3標準曲線的建立
　　
　　精密吸取綠原酸濃度為0.0848mg/mL的對照品儲備溶液1、2、4、8、10mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,在上述色譜條件下測定,以峰面積對濃度進行線性回歸,得回歸方程為：Y＝55799416X－28478.3（r＝0.9999）。結(jié)果表明,綠原酸檢測濃度在0.0848～0.848μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。
　　
　　2.4精密度試驗
　　
　　精密吸取對照品溶液10μL,按上述色譜條件重復(fù)進樣6次,測定峰面積。結(jié)果RSD＝0.52%,表明本方法精密度良好。
　　
　　2.5穩(wěn)定性試驗
　　
　　取同一批號（0602001）樣品,按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件分別在0、1、2、4、6、8h進樣,測定綠原酸峰面積。結(jié)果RSD＝0.64%,表明供試品溶液在8h之內(nèi)穩(wěn)定。
　　
　　2.6重復(fù)性試驗
　　
　　取同一批號（0602001）樣品精密稱取0.5g,共6份,按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件測定每份樣品中綠原酸含量。結(jié)果綠原酸的平均含量為1.190mg/g,RSD＝0.88%,表明方法重復(fù)性良好。
　　
　　2.7加樣回收率試驗
　　
　　精密稱取綠原酸對照品適量,配制成0.0124mg/mL的對照品儲備溶液,取同一批號（0602001）樣品,研細,混勻,取0.25g,精密稱定,共6份,精密加入綠原酸對照品儲備溶液各25mL,按照“2.2.2”項下方法制得供回收率用供試品溶液,按上述色譜條件測定,計算回收率。結(jié)果平均回收率為102.60%,RSD＝1.69%。結(jié)果見表1。表1加樣回收率試驗結(jié)果（略）
　　
　　8樣品含量測定
　　
　　取本品3批,按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件進行測定,結(jié)果見表2。表2樣品中綠原酸含量測定結(jié)果（略）
　　
　　3討論
　　
　　取綠原酸對照品的甲醇溶液,在190～650nm波長范圍進行掃描,在327nm波長處有較大吸收,與2005年版《中華人民共和國藥典》中金銀花的測定波長一致,故測定波長選定為327nm。
　　
　　以多種比例乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85、13∶87、10∶90）試驗選擇流動相[3-5],當比例為10∶90時,綠原酸峰分離度大于1.5,保留時間為6.967min,主峰與雜質(zhì)峰分離良好,同時無干擾峰,基線平直。