止血海綿是藥用明膠經發(fā)泡與甲醛交聯(lián)制成的一種醫(yī)療產品。甲醛不僅對止血海綿植入部位的組織有刺激作用，而且還被認為是一種可疑致癌物。因此，準確測定止血海綿中微量殘留甲醛的含量是控制該類產品生產和質量的關鍵〔1〕。目前，甲醛的測定方法有容量法、酚試劑法、乙酰丙酮光度法、變色酸光度法、氣相色譜法和動力學光度法等，其各有優(yōu)缺點〔2，3〕。本文對酚試劑法測定止血海綿中的微量殘留甲醛的含量進行了探討，獲得滿意結果，報告如下。
　　
　　1材料與方法
　　
　　11主要儀器與試劑（1）酚試劑顯色液：稱量005g酚試劑［3-甲基-苯并噻唑胺C6H4SN（CH3）C：NNH2.HCl，簡稱MBTH］，加水溶解，稀釋至500ml。放冰箱保存，可穩(wěn)定3d。（2）1%硫酸鐵銨溶液：稱量10g硫酸鐵銨，用01mol/L鹽酸溶液溶解，并稀釋至100ml。（3）甲醛標準儲備溶液：量取28ml含量為36%～38%甲醛溶液放入1000ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋到刻度。此溶液1ml約含1mg甲醛。用碘量法標定其準確濃度。此溶液可穩(wěn)定3個月。（4）甲醛標準工作液：臨用時，將甲醛標準儲備液用水稀釋成100ml含0001mg甲醛的標準工作液。（5）儀器：752型分光光度計（上海第三分析儀器廠）。（6）材料：止血海綿（江蘇南通某工廠）。
　　
　　12測定方法
　　
　　121標準曲線繪制用標準溶液繪制標準曲線：取10ml具塞比色管，分別加入系列甲醛標準溶液和4ml酚試劑顯色液及05ml1%硫酸鐵銨溶液，以水稀釋至刻度搖勻，于35℃水浴中放置15min,在630nm波長下，以水作參比，測定各管的吸光度，以甲醛含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。
　　
　　122樣品溶液制備及測定準確稱取一定量的止血海綿，按照國家標準GB/T16886.12-2000加入規(guī)定量的生理鹽水，于（37±1）℃下浸提一定時間〔4〕。準確吸取1ml樣品溶液于10ml比色管中，按制作標準曲線的操作標準曲線的操作步驟測定吸光度。
　　
　　2結果與分析
　　
　　21實驗條件的選擇
　　
　　211測定溫度的選擇分別取09812μg/ml的甲醛工作液1ml，加入4ml酚試劑顯色液及05ml的1%硫酸鐵銨溶液，混勻，分別放置。5，10，20，25，35，40℃進行15min顯色反應，在630nm波長下，測定其吸光度。實驗結果表明，溫度對甲醛與酚試劑的顯色反應影響很大。溫度低時，吸光度較小，而當溫度達到25℃時，吸光度趨于穩(wěn)定。這主要是因為甲醛與酚試劑的顯色反應在低溫時反應不完全所致。因此，將甲醛與酚試劑的顯色反應溫度控制在35℃水浴中進行。
　　
　　212酚試劑用量的選擇分別取09812μg/ml的甲醛工作液1ml，加入不同體積的酚試劑顯色液及05ml1%硫酸鐵銨溶液，用水稀釋到相同體積后搖勻，測定其吸光度。結果可見，當酚試劑用量在30～60ml時，吸光度達到最大，并且比較穩(wěn)定。因此，將酚試劑的用量定為40ml。
　　
　　213硫酸鐵銨溶液用量的選擇按實驗方法固定甲醛工作液的體積（1ml）和酚試劑的用量（40ml），改變硫酸鐵銨溶液的體積，測定不同條件下的吸光度。結果表明，當硫酸鐵銨溶液體積為04～09ml時，吸光度達到最大，并基本保持穩(wěn)定，因此，硫酸鐵銨溶液的用量定為05ml。
　　
　　214止血海綿浸提時間的確定國家標準中關于醫(yī)療制品的浸提時間推薦了1，12，24，48，72h。為了確定止血海綿的最佳浸提時間，分別于浸提不同時間后，測定浸提液中的甲醛濃度。結果表明，浸提液中甲醛的濃度的隨時間先上升又降低。這主要是止血海綿中的甲醛浸提出來需要一定的時間，但同時浸提出來的甲醛又被氧化。因此，將浸提時間定為24h。
　　
　　22標準曲線的線性范圍及檢出限按實驗方法測定一系列不同體積甲醛溶液體系的吸光度。當甲醛含量在002～15μg/5ml時，有良好的線性關系。因此，甲醛的檢出限為0004μg/ml。
　　
　　23回收率測定稱取一定量的止血海綿按上述樣品測定方法測定樣品中甲醛的含量。在同樣的樣品溶液中準確加入一定量的甲醛標準溶液，按相同的分析步驟測定其中加入甲醛的含量，并計算回收率，分別進行5次平行測定�；厥章史謩e為966%，1040%，1010%，1028%，952%。
　　
　　24止血海綿樣品中甲醛含量的測定分別取不同批次的止血海綿按上述測定方法測定樣品溶液中甲醛的含量，計算止血海綿中的甲醛含量，每個樣品平行測定5次，并計算相對標準偏差（RSD），3個樣品的相對標準偏差為37%，29%，23%。
　　
　　3小結
　　
　　酚試劑分光光度法測定甲醛濃度線性范圍為0004～03μg/ml。相對標準偏差為23%～37%，回收率為952%～1040%。具有簡便、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好等特點。