【摘要】目的建立解毒利尿顆粒中甘草酸含量的高效液相測(cè)定方法。方法采用DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-[0.02mol·L-1醋酸銨-冰醋酸（33∶1）]（64∶36）為流動(dòng)相，流速為1ml·min-1;柱溫30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)250nm。結(jié)果甘草酸在0.15～0.75μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9998），該方法平均回收率為98.99%，RSD為1.74%（n=6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定易行、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性較好，結(jié)果可靠，可為解毒利尿顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供有效依據(jù)。
　　
　　【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法;解毒利尿顆粒;甘草酸
　　
　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofglycyrrhizicacidinJieduLiniaogranulesbyHPLC.MethodsDiamonsilTMC18column（5μm,250mm×4.6mm）wasusedwithmethol-（0.02mol·L-1ammoniumacetate-glacialaceticacid（33∶1））（64∶36）asmobilephase.Theflowratewas1.0ml·min-1，thecolumntemperaturewas30℃andthedetectionwavelengthwas250nm.ResultsThecalibrationcurvewerelinearwithintherangeof0.15～0.75μg（r=0.9998）.Theaveragerecoveryratewas98.99%（RSD=1.74%）.ConclusionThemethodisconvenient,stableandaccurate,soitcanbeusedfordeterminationofglycyrrhizicacidinJieduLiniaogranules.
　　
　　Keywords：HPLC;JieduLiniaoGranules;Glycyrrhizicacid
　　
　　解毒利尿顆粒由生甘草、白茅根、赤芍、紫蘇葉、生姜、豬苓等6味藥材組成，具有清熱解毒、利尿等功效，臨床上主要用于不明原因的中毒，因本品具有減輕中毒癥狀的作用，可為臨床診斷確定中毒原因提供時(shí)間。甘草為本復(fù)方制劑中的君藥，甘草酸是該藥的主要有效成分，具有抗炎、解毒、保肝和增強(qiáng)免疫等作用[1]，因此本實(shí)驗(yàn)以甘草酸為指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定，對(duì)本品進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　
　　目前，甘草酸的含量測(cè)定方法有高效液相色譜法[2]、薄層掃描法[3]和高效毛細(xì)管電泳法[4]和光纖近紅外光譜法[5]等，因高效液相色譜法具有方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，故本研究采用此法測(cè)定解毒利尿顆粒中甘草酸的含量，旨在達(dá)到對(duì)本品進(jìn)行質(zhì)量控制的目的。
　　
　　1儀器與試藥
　　
　　Waters1525高效液相色譜儀（配Waters2487紫外可見(jiàn)檢測(cè)器），MeLLennium32色譜工作站;KQ-250DB數(shù)控型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器公司）;METTERToledoAG1351/10萬(wàn)電子分析天平（瑞士METTER公司）。
　　
　　甘草酸銨（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110731-200511）。解毒利尿顆粒樣品（自制，批號(hào)：20060811，20060813，20060816）。甲醇為色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。
　　
　　2方法與結(jié)果
　　
　　2.1色譜條件色譜柱為DiamonsilTMC18（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相為甲醇-[0.02mol·L-1醋酸銨-冰醋酸（33∶1）]（64∶36）;檢測(cè)波長(zhǎng)250nm;流速1.0ml·min-1;柱溫30℃。進(jìn)樣量10μl。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，考慮到儀器、色譜柱、流動(dòng)相的配制和溫度等系統(tǒng)因素的影響，規(guī)定理論板數(shù)按甘草酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000。
　　
　　2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的甘草酸銨對(duì)照品1.25mg，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每毫升含甘草酸銨50μg，相當(dāng)于甘草酸48.975μg）。
　　
　　2.3供試品溶液的制備取本品（批號(hào)20060811）5袋，粉碎，稱取0.5g，精密稱定，置100ml的量瓶中，加40%甲醇稀釋至刻度，超聲提取40min，靜置，取上清液，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
　　
　　2.4陰性供試品溶液的制備按解毒利尿顆粒的處方，取除甘草提取物外的其他輔料依照本品制備工藝制備陰性樣品制劑。取陰性樣品制劑0.5g，精密稱取，按供試品溶液的制備方法制得陰性供試品溶液。
　　
　　2.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)按供試品測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，甘草酸對(duì)照品與解毒利尿顆粒中甘草酸的保留時(shí)間一致，陰性供試品溶液在甘草酸色譜峰位置處無(wú)相應(yīng)的峰出現(xiàn)，同時(shí)與其他組分分離完全，分離度為2.04，理論板數(shù)按甘草酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。結(jié)果見(jiàn)圖1。
　　
　　2.6線性關(guān)系考察分別精密自動(dòng)吸取此溶液3，5，8，10，13，15μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量X（μg）對(duì)峰面積的積分值Y進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程：Y=784579X-19762（r=0.9998），試驗(yàn)結(jié)果表明甘草酸銨進(jìn)樣量在0.15～0.75μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
　　
　　A�哺什菟徜@對(duì)照品B�补┰嚻稢�碴幮詫�(duì)照1.甘草酸
　　
　　2.7精密度實(shí)驗(yàn)精密注入對(duì)照品溶液10μl，依法連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得甘草酸峰面積的RSD=1.82%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度良好。
　　
　　2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液（批號(hào)：20060811），按0，2，4，6，8，12h時(shí)間間隔進(jìn)樣，分別測(cè)定峰面積，測(cè)定甘草酸的含量結(jié)果RSD為2.92%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定，樣品含量無(wú)明顯變化，在此時(shí)間內(nèi)測(cè)定供試品化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
　　
　　2.9重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取6份樣品（批號(hào)：20060811），同前法測(cè)定樣品中甘草酸的含量，RSD為2.45%，表明重現(xiàn)性良好。
　　
　　2.10加樣回收實(shí)驗(yàn)取已知準(zhǔn)確含量的樣品（批號(hào)：20060811，含量為125mg/袋）6份，每份0.25g，精密稱定，置100ml量瓶中。精密加入甘草酸銨對(duì)照品（2.483mg），按樣品測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果平均回收率為98.99%，RSD為1.74%，加樣回收率均符合要求。結(jié)果見(jiàn)表1表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　
　　2.11樣品含量測(cè)定按上述方法，測(cè)定3批解毒利尿顆粒中甘草酸的含量。結(jié)果見(jiàn)表2表2樣品每袋含量測(cè)定結(jié)果
　　
　　3討論
　　
　　3.1提取方法的確定文獻(xiàn)報(bào)道，甘草酸的提取方法有溶劑提取法[6]、微波法[7]及超臨界CO2流體萃取法[8]等。溶劑提取法提取時(shí)間長(zhǎng)，雜質(zhì)溶出率較高，工作量大;微波法雖提取時(shí)間短，提取率高，但是雜質(zhì)溶出率高;超臨界CO2流體萃取法快速、高效、選擇性專一且無(wú)污染，但存在操作壓強(qiáng)大，夾帶劑濃度高，萃取時(shí)間較長(zhǎng)，儀器設(shè)備昂貴等不足。超聲提取法具有方便、快捷、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)，因此本試驗(yàn)采用此法對(duì)甘草酸進(jìn)行提取。
　　
　　3.2提取時(shí)間的確定取本品超聲處理不同時(shí)間（20，40，60，80，100min），分別測(cè)定其峰面積，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲提取40min后，隨提取時(shí)間延長(zhǎng)峰面積不再增加。因此本試驗(yàn)中提取時(shí)間定為40min。
　　
　　3.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇解毒利尿顆粒樣品及甘草酸銨對(duì)照品的光譜圖表明，甘草酸銨在250nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故將250nm作為樣品含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。
　　
　　3.4流動(dòng)相的選擇根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[9，10]，實(shí)驗(yàn)中曾采用乙腈-水-冰醋酸為流動(dòng)相，改變不同比例，均未能達(dá)到較適宜的保留時(shí)間和分離效果;選擇甲醇-醋酸銨-冰醋酸為流動(dòng)相，調(diào)整比例后可以使保留時(shí)間適宜，使分離度和理論板數(shù)均符合要求。
文章鏈接：中國(guó)化工儀器網(wǎng) http://www.chem17.com/news/detail/25207.html