【摘要】目的建立狼瘡靈顆粒中芍藥苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法,色譜柱：HypersilODS-2（150mm×4.6mm,5.0μm）；流動相：乙腈-0.4%的磷酸水溶液（10∶90）；檢測波長：230nm；流速：1.0mL/min,柱溫：25℃。結果芍藥苷在0.608～3.04μg范圍內呈良好的線性關系（r＝0.9999）,加樣回收率97.77%,RSD＝0.62%（n＝5）。結論該方法快速可行、簡捷準確、重復性好、結果可靠,可用于控制狼瘡靈顆粒的質量。
　　
　　【關鍵詞】狼瘡靈顆粒；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測定
　　
　　Abstract：ObjectiveToestablishanaccuratemethodfordeterminationofpaeoniflorininLangchuagnlingGranules.MethodsHypersilODS-2（4.6mm×150mm,5.0μm）inanovenat25℃wasneed,withamobilephaseconsistingofacetonitril-0.4%granolitetreatment（10∶90）andUVdetectorat230nm,theflowratewas1.0mL/min.ResultThelinearrangeofpaeoniflorinwaswithin0.608～3.04μg（r＝0.9999）.Theaveragerecoverywas97.77%andRSDwas0.62%（n＝5）.ConclusionThemethodissimpleandaccurate.ItcanbeusedforthequalitycontrolofLangchuagnlingGranules.
　　
　　Keywords：LangchuanglingGranules；paeoniflorin；HPLC；contentdetermination
　　
　　狼瘡靈顆粒主要是由赤芍、牡丹皮、生地黃、忍冬藤等中藥組成的醫(yī)院復方制劑,具有涼血散瘀、清熱解毒之功效。方中芍藥苷為主要有效成分,具有濃度和機能依賴性的雙向免疫調節(jié)作用,臨床主要用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。本研究采用高效液相色譜（HPLC）法對狼瘡靈顆粒中芍藥苷進行含量測定,建立芍藥苷含量的HPLC測定方法[1-2]。
　　
　　1儀器與試藥
　　
　　Agilent1100型高效液相色譜儀,MettlerToledoAG135型電子分析天平（瑞士Mettler公司）,SCQ-250型超聲波提取儀（上海申波超聲公司）。芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供,批號110736-200732）；狼瘡靈顆粒（成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院提供,批號100315、100318、100322、100329,規(guī)格為15g/袋）。乙腈為色譜純,水為純凈水,其他試劑均為分析純。
　　
　　2方法與結果
　　
　　2.1色譜條件
　　
　　色譜柱：HypersilODS-2（4.6mm×150mm,5.0μm,依利特公司）；流動相：乙腈-0.4%的磷酸水溶液（10∶90）；檢測波長：230nm；流速1.0mL/min；柱溫：25℃；進樣量：10μL。
　　
　　2.2溶液制備
　　
　　2.2.1對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品3.04mg,置10mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,即得對照品溶液（1mL含芍藥苷0.304mg）。
　　
　　2.2.2供試品溶液的制備取本品0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50mL,搖勻,稱定重量,超聲處理（功率300W,頻率40kHz）20min,放冷至室溫[3],再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
　　
　　2.2.3陰性對照品溶液的制備按狼瘡靈顆粒制備工藝制得缺少赤芍的陰性樣品制劑,再按“2.2.2”項下方法制得陰性對照品溶液。
　　
　　2.3線性關系考察
　　
　　取上述對照品溶液,分別自動進樣2、4、6、8、10μL。以芍藥苷峰面積積分值為縱坐標,以芍藥苷對照品的進樣量（μg）為橫坐標,繪制標準曲線。得回歸方程為：Y＝1427.68X＋5.96,r＝0.9999。結果表明,進樣量在0.608～3.04μg范圍內線性關系良好。
　　
　　2.4專屬性試驗
　　
　　精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10μL,按上述色譜條件測定。結果在芍藥苷出峰位置無干擾峰（見圖1）。
　　
　　A
　　
　　B
　　
　　C
　　
　　注：A.對照品；B.供試品；C.陰性對照品
　　
　　圖1狼瘡靈顆粒HPLC圖譜
　　
　　2.5精密度試驗
　　
　　精密吸取對照品溶液10μL,重復進樣5次,測得峰面積積分值,計算,得芍藥苷的RSD＝1.19%（n＝5）,表明精密度良好。
　　
　　2.6穩(wěn)定性試驗
　　
　　精密吸取同一批號的供試品溶液（批號100318）,按色譜條件分別于制備后0、4、8、12、16、24h進行測定。記錄峰面積,計算得芍藥苷的RSD＝1.30%（n＝5）,表明芍藥苷含量在24h內穩(wěn)定性好。
　　
　　2.7重復性試驗
　　
　　精密稱取同一批號（批號100318）的樣品5份,按供試品溶液制備方法制備,并按上述色譜條件測定,測得芍藥苷平均含量9.73mg/g,RSD＝1.24%（n＝5）。
　　
　　2.8加樣回收率試驗
　　
　　精密稱取已知含量的狼瘡靈顆粒0.10g,精密添加一定量的芍藥苷對照品,按供試品溶液制備方法制備,并按上述色譜條件測定。結果平均回收率為97.77%,RSD＝0.62%。見表1。
　　
　　2.9樣品測定
　　
　　分別精密稱取不同批號的狼瘡靈顆粒約0.5g,按供試品溶液制備方法制備,按以上色譜條件測試。結果見表2。根據(jù)試驗結果,考慮到藥材的來源,以及制劑生產(chǎn)、儲藏等因素,暫擬定每批樣品以芍藥苷含量為標準,每1g顆粒不得低于9.7mg。
　　
　　表1加樣回收率試驗結果
　　
　　樣品重
　　
　　量（g）樣品中含
　　
　　量（mg）加入量
　　
　�。╩g）測得量
　　
　�。╩g）回收率
　　
　　（%）平均回收
　　
　　率（%）RSD
　　
　�。�%）
　　
　　0.10190.9911.0011.96797.43
　　
　　0.10240.9960.9751.95598.35
　　
　　0.10170.9890.9871.94696.9297.770.62
　　
　　0.10150.9870.9901.96198.29
　　
　　0.10230.9950.9841.95897.84
　　
　　表2樣品中芍藥苷含量測定結果（mg/g）
　　
　　批號芍藥苷含量平均含量
　　
　　123
　　
　　1003159.789.719.739.74
　　
　　1003229.749.709.719.72
　　
　　1003299.729.789.789.76
　　
　　3討論
　　
　　本試驗考察了水浴回流提取、超聲提取、索氏提取3種方法,結果超聲提取法優(yōu)于回流法和索氏提取法；考察了甲醇、70%乙醇和50%乙醇等3種提取溶媒對芍藥苷提取效果的影響,結果甲醇提取效果明顯優(yōu)于70%乙醇和50%乙醇；考察了提取時間對芍藥苷提取效果的影響,結果以甲醇為提取溶媒,超聲提取20min效果較優(yōu)。
　　
　　本試驗曾采用2005年版《中華人民共和國藥典》（一部）赤芍中芍藥苷測定所用流動相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（40∶65）,結果主峰分離度不好,存在干擾,經(jīng)過分析比較,確定了乙腈-0.4%磷酸水溶液（10∶90）為流動相,雜峰集中,可使芍藥苷得到較好的分離。
　　
　　本法提取方法簡單,分析快速,精密度高,重復性好,陰性無干擾,可較好控制本品的質量。