【摘要】目的建立橘核中橙皮苷含量的測(cè)定方法，為橘核的質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制提供科學(xué)依據(jù)。方法采用HPLC法進(jìn)行測(cè)定。色譜柱：KromasilC18色譜柱（250mm×4.6mm,5μm）;流動(dòng)相：甲醇-36%（體積分?jǐn)?shù)）乙酸-水（體積比38∶2∶60）;流速：1.0mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)：285nm;柱溫：25℃。結(jié)果橙皮苷在0.103～2.060μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999，平均回收率為95.87%（n=6），RSD=2.46%，3批橘核中橙皮苷含量介于0.1～0.2mg·g-1之間。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可作為橘核中橙皮苷的定量分析和質(zhì)量控制方法。
　　
　　【關(guān)鍵詞】橘核;橙皮苷;含量測(cè)定;質(zhì)量控制;高效液相色譜法
　　
　　Abstract:ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofhesperidininsemensofCitriReticulatae.MethodsHPLCwasperformedonKromasil-C18column（250mm×4.6mm,5μm）at25℃withthemobilephaseofmethanol-36%aceticacid-water（38∶2∶60）ataflowrateof1.0mL·min-1,andthedetectionwavelengthwassetat285nm.ResultsThelinearityofhesperidinwasgoodintherangeof0��103-2.060μg,r=0.9999,anditsaveragerecoveryratewas95.87%（n=6）,RSD=2.46%.Thecontentofhesperidinin3sampleswasbetween0.1mg·g-1and0.2mg·g-1.ConclusionThismethodissimple,accurateandsuitableforthequantitativedeterminationofhesperidininSemenCitriReticulatae.
　　
　　Keywords:SemenCitriReticulatae;hesperidin;contentdetermination;qualitycontrol;HPLC
　　
　　橘核[1]為蕓香科植物橘CitrusreticulutaBlanco及其栽培變種的種子，其味苦，平。歸肝、腎經(jīng)。具有理氣、散結(jié)、止痛的功效，臨床可用于治療小腸疝氣，睪丸腫痛，乳癰腫痛。橘核中含有橙皮苷和檸檬苦素類物質(zhì)等。目前橘核的質(zhì)量控制尚缺乏較全面統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，雖已有關(guān)于橘核中檸檬苦素類物質(zhì)含量測(cè)定的報(bào)道[2]，但檸檬苦素類物質(zhì)很難得到純度較高的單體化合物，故將其作為質(zhì)控指標(biāo)仍存在一定的局限性�！吨袊�(guó)藥典》2010版一部[橘核]項(xiàng)下描述“橘核子葉細(xì)胞顯微觀察可見(jiàn)針簇狀橙皮苷結(jié)晶”，可見(jiàn)橙皮苷是橘核質(zhì)量控制的指標(biāo)之一，值得深入研究。橙皮苷具有明確的藥理作用，如：維持滲透壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管韌性、縮短出血時(shí)間、降低膽固醇等，在臨床上可用于心血管系統(tǒng)疾病的輔助治療，可配制多種防止動(dòng)脈硬化和心肌梗死的藥物，是成藥“脈通”的主要原料之一[3]。此外，橙皮苷氫化后是天然甜味劑二氫查爾酮，其甜度是蔗糖的1000倍，可用于開(kāi)發(fā)功能性食品[4-5]。
　　
　　本研究旨在建立橘核中橙皮苷的含量測(cè)定方法，為橘核質(zhì)量的評(píng)價(jià)與控制提供科學(xué)依據(jù)，為其應(yīng)用范圍的進(jìn)一步擴(kuò)大奠定理論基礎(chǔ)。
　　
　　1儀器與試藥
　　
　　1.1儀器
　　
　　天美LC2000型高效液相色譜儀（LC2030檢測(cè)器、LC2130泵、L-2200自動(dòng)進(jìn)樣器），T2000P色譜工作站;BP211D型電子分析天平（德國(guó)sartorius公司），LK-400藥用粉碎機(jī)（浙江城關(guān)紅利數(shù)控制造廠）。
　　
　　1.2試藥
　　
　　橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110721-200613，供含量測(cè)定用）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;橘核藥材分別購(gòu)自廣東康美藥業(yè)（1）、廣州致信藥業(yè)（2）及廣州市采芝林連鎖藥店（3），經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院陳康教授鑒定皆為橘CitriReticulataeBlanco的干燥種子;流動(dòng)相所用甲醇為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。
　　
　　2方法與結(jié)果
　　
　　2.1樣品溶液的制備
　　
　　2.1.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的橙皮苷對(duì)照品2.06mg，用甲醇溶解并定容至10mL，制成每1mL含橙皮苷0.206mg的對(duì)照品溶液。
　　
　　2.1.2供試品溶液的制備取經(jīng)粉碎機(jī)粉碎的橘核粉末約1g，精密稱定，用石油醚100mL索氏提取4.5h，濾渣揮干石油醚，置圓底燒瓶中，加甲醇20mL,水浴加熱回流1h，靜置冷卻至室溫，濾過(guò)，濾渣再加甲醇20mL重復(fù)提取1次，合并2次濾液，濃縮定容至10mL，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
　　
　　2.2色譜條件與系統(tǒng)適用性
　　
　　色譜柱：安譜公司KromasilC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：甲醇-36%（體積分?jǐn)?shù)）乙酸-水（體積比38∶2∶60）;流速：1.0mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)：285nm;柱溫：25℃。分別精密吸取對(duì)照品、供試品溶液各10μL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。
　　
　　2.3線性關(guān)系考察
　　
　　精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.5、1、2.5、5、7.5、10mL，分別置10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL進(jìn)樣。按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，橙皮苷對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=2×106X-1��4823×104，r=0.9999。結(jié)果表明，橙皮苷在0��103～2.060μg之間線性關(guān)系良好。[PSd201;S*2〗A.橙皮苷對(duì)照品;B.橘核供試品圖1橘核HPLC圖Figure1HPLCchromatograms
　　
　　2.4精密度試驗(yàn)
　　
　　精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶液（0.206mg·mL-1）10μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定橙皮苷色譜峰峰面積，RSD為1.82%（n=6），表明儀器精密度良好。
　　
　　2.5重復(fù)性試驗(yàn)
　　
　　取第3批的橘核樣品6份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定橙皮苷峰面積，計(jì)算含量，其RSD為2.50%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。
　　
　　2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)
　　
　　取同一份供試品溶液（第3批），分別在0、3、6、12、18、24h精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定橙皮苷峰面積，計(jì)算含量，其RSD為1.76%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
　　
　　2.7回收率試驗(yàn)
　　
　　取已知橙皮苷質(zhì)量的樣品（第1批）6份，每份取約1g，精密稱定。分別準(zhǔn)確加入質(zhì)量濃度為0��206mg·mL-1的橙皮苷對(duì)照品溶液1mL，混合后揮干甲醇。按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備回收率供試樣品溶液，依法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。表1回收率試驗(yàn)結(jié)果
　　
　　2.8樣品測(cè)定
　　
　　取3批橘核樣品,每批3份，精密稱定，測(cè)定其含水量，同時(shí)按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定其橙皮苷含量，結(jié)合含水量分別計(jì)算樣品中橙皮苷凈含量。3批橘核中橙皮苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.17、0.18、0.11mg·g-1，RSD值分別為2.25%、2.06%和1.80%。
　　
　　3討論
　　
　　橘核為種子類藥材，富含脂肪油。試驗(yàn)對(duì)脫脂后甲醇提取樣品溶液和不經(jīng)脫脂直接用甲醇提取的樣品溶液進(jìn)行了比較研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)未經(jīng)脫脂而直接提取的樣品干擾成分較多，峰形較差。此外，樣品中的脂肪油對(duì)柱體污染性較強(qiáng)，所以制備樣品溶液時(shí)應(yīng)該先以石油醚脫脂，再以甲醇提取。
　　
　　試驗(yàn)對(duì)常用的流動(dòng)相系統(tǒng)如甲醇-水、乙腈-水、甲醇-酸水及各系統(tǒng)組分不同比例間進(jìn)行了比較，結(jié)果表明采用甲醇-36%（體積分?jǐn)?shù)）乙酸-水（體積比38∶2∶60）進(jìn)行洗脫效果為佳。在該條件下橙皮苷分離度良好，峰形窄而對(duì)稱，且不受其他峰的干擾。
　　
　　本實(shí)驗(yàn)建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于橘核中橙皮苷含量的測(cè)定，對(duì)于橘核及其產(chǎn)品的質(zhì)量控制、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充完善均具有重要意義。