摘要以實例測定方式介紹杧果葉片多效唑含量的氣相色譜測定方法,包括定性分析、定量分析和實例測定分析;定量分析采用標準曲線法,其線性相關(guān)系數(shù)為0.9991,多效唑的保留時間為15.087min。改進了樣品前處理方法,使其更為簡便和適用,以期為具備類似條件者提供參考。
　　
　　關(guān)鍵詞氣相色譜法;杧果葉片;多效唑;含量
　　
　　AbstractTheexperimentofpaclobutrazoltestinmangoleaveswithgaschromatographwasintroduced,includingqualitativeanalysis,quantativeanalysisandthetestanalysisasanexample;standardcurvemethodwasadoptedinthequantativeanalysis,thecorrelationcoefficientwas0.9991,theretentiontimeofpaclobutrazolinthechromatogramwas15.087minutes.Theimprovedmethodofsamplefrontprocesseswasmoresimpleandpratical,hopingforreferencetotheresearchersonthesimilarcondition.
　　
　　Keywordsgaschromatographtestmethod;mangoleaves;paclobutrazol;content
　　
　　多效唑（Paclobutrazol）是1984年由英國卜內(nèi)門（ICI）公司開發(fā)的一種內(nèi)源赤霉素合成抑制劑[1]。其分子式為C15H20N3OCl。多效唑能抑制赤霉素的生物合成和由赤霉素所控制的生理效應,主要通過調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的激素平衡,延緩植物生長,抑制莖枝伸長,促進成花和坐果[2]。同其他植物生長抑制劑相比,多效唑具有用量少、價格低廉、效果明顯等優(yōu)點,因此目前已被廣泛用于多種作物生產(chǎn)。
　　
　　近些年來,在我國的杧果生產(chǎn)中,多效唑被大量應用于促花、花期調(diào)節(jié)以及誘導反季節(jié)開花[3]。而施用多效唑后,杧果植株對多效唑的吸收和轉(zhuǎn)運以及其在植株體內(nèi)的殘留情況目前了解并不多,筆者就杧果葉片多效唑含量的氣相色譜測定方法進行研究,以期為今后這方面的進一步研究提供參考。
　　
　　1材料與方法
　　
　　1.1儀器與試劑
　　
　　儀器為氣相色譜儀（BEIFENSP-3400氣相色譜儀）,配有HP-5色譜柱和FID檢測器、搗碎機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。試劑為甲醇、二氯甲烷、石油醚、丙酮（分析純）;氫氧化鈉、無水硫酸鈉、硅鎂吸附劑等。
　　
　　1.2樣品處理
　　
　　1.2.1樣品的制備。將杧果鮮葉片樣品用水洗凈、晾干,剪碎后放入搗碎機磨碎,精確稱取10.0~15.0g放入三角瓶中,再加入70mL甲醇,在室溫下放置1h,每隔20min晃動混勻1次。之后用布氏漏斗抽濾（抽濾時用3層濾紙,或重復抽濾2次,以確保濾液中沒有固體物質(zhì)）,然后用50mL的甲醇淋洗2次,收集濾液,再加入30mL去離子水,混合均勻。在45℃恒溫水浴下,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至水相（終體積約為30mL）,用預先配置的1moL/L的氫氧化鈉將水相的pH值調(diào)節(jié)為11。將水相轉(zhuǎn)移到125mL的分液漏斗中,加入30mL二氯甲烷,混合均勻,靜置約10min使混合液充分分層（上層似乳濁液為水相,下層為二氯甲烷的有機相）,放出下層液體,用三角瓶收集,再重復上述操作2次。合并3次收集的二氯甲烷有機相,在30℃恒溫水浴下,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至約5mL,待經(jīng)層析柱凈化。
　　
　　1.2.2樣品的凈化。制備玻璃層析柱:玻璃管采用25mL的堿式滴定管,將下端的橡皮管一段去掉,只使用上端的玻璃管,用長的玻璃棒作為填充用的工具。底部墊入少許脫脂棉,依次填入2cm厚的無水硫酸鈉、6g硅鎂吸附劑、2cm厚的無水硫酸鈉。先用20mL石油醚淋洗層析柱,然后將前面步驟中得到的提取液轉(zhuǎn)移到層析柱內(nèi),最后用10mL石油醚/甲醇（石油醚∶甲醇=97∶3）溶液淋洗,收集淋洗液。放入干燥箱中蒸發(fā)至干,加入0.5mL丙酮,使蒸發(fā)干的物質(zhì)完全溶解,待上機測定。
　　
　　1.3多效唑標準樣品的制備
　　
　　準確稱量0.0126g含量為99.7%的多效唑標準品,用丙酮溶解,定容至25mL,然后取1.5mL,再稀釋定容到25mL,此時的多效唑濃度為30mg/L,以此溶液作為標準液配制不同濃度的多效唑溶液。分別取30mg/L的多效唑溶液0.5、1.0、2.0、5.0mL定容至10.0mL,則溶液的濃度分別為1.5、3.0、6.0、15.0mg/L。
　　
　　1.4檢測參數(shù)設計
　　
　　載氣（高純N2）流速:30mL/min;H2流速:40mL/min;空氣流速:300mL/min;注樣器溫度:250℃;柱初溫:50℃;柱終溫:250℃;輔助箱溫度:275℃;檢測器溫度:50℃;設定柱溫、注樣器、輔助箱、檢測器極限溫度均為300℃;毛細管FID升溫速率不能超過20℃/min。
　　
　　2結(jié)果與分析
　　
　　2.1多效唑的定性分析
　　
　　首先以高濃度（252mg/L）的多效唑溶液對多效唑的峰進行保留時間定性,由圖1可以看出,在2min附近有一個很大的峰,此為溶劑丙酮的峰,另外一個比較明顯的是位于15.087min的峰,此峰可確認為多效唑的峰,即多效唑在該測定條件下的保留時間約為15min。在之后的色譜圖分析中,默認距離15.087min最近的峰為多效唑峰。
　　
　　2.2多效唑的定量分析
　　
　　采用標準曲線法,以峰面積定量,分別檢測多效唑濃度為0、1.5、3.0、6.0、15.0、30.0mg/L的標準樣品在氣相色譜圖中分析多效唑峰的峰面積,作出多效唑濃度和峰面積的關(guān)系圖（見圖2）。其回歸方程為y=436.69x 894.40,相關(guān)系數(shù)R2=0.9991。
　　
　　2.3杧果葉片中多效唑含量的測定
　　
　　試驗采集的杧果葉片樣品為四季蜜杧的葉片,果園于2009年5月15日土施多效唑18g/株（含量15%）以促反季節(jié)開花,采集時間分別為5月25日、28日、31日和6月3日、6日、9日和12日,圖3為5月28日所采集葉樣的多效唑色譜圖。根據(jù)圖3和圖2,計算出測定葉樣的多效唑提取液中多效唑濃度為0.6188mg/L,最后提取液的量為0.5mL,初始使用的葉樣量為10.1706g。由此計算得葉樣中多效唑的含量為0.0304μg/g。
　　
　　3結(jié)論與討論
　　
　　隨著檢測技術(shù)水平和檢測儀器設備功能的不斷進步,作物體內(nèi)多效唑含量的測定有多種方法,因所具備的檢測條件不同,所采用的方法也不盡相同。目前國內(nèi)外常用的測定方法有氣相色譜法和液相色譜法[4-6],其優(yōu)點為穩(wěn)定性好、精確度高。
　　
　　在本文測定杧果葉片多效唑含量實例中,多效唑的保留時間即出峰時間為15min左右,但在不同的檢測條件下其出峰時間不盡相同,在每次具體的測定中,應根據(jù)當次定性測定分析所得確認的保留時間而定。在杧果的生產(chǎn)實踐中,一般都要求在安全用量范圍內(nèi)施用多效唑,以免造成樹勢衰退等副作用。杧果葉片中的多效唑含量較低,因此在使用氣相色譜法測定過程中,多效唑的信號很弱,易受到其他因素的干擾而影響測定的準確性[7,8],建議對每份樣品的測定應重復3次以上。上述測定方法對樣品的前處理作了一些改進,其處理方法更為簡便和適用。