目的建立蠶蛹提取物中有機(jī)溶劑殘留量的測定方法。方法采用頂空進(jìn)樣毛細(xì)管氣相色譜法，測定了蠶蛹提取物中汽油的殘留量。以70%N,N-二甲基甲酰胺溶液為溶劑，色譜柱為HP-1毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25μm），F(xiàn)ID檢測器。汽化室溫度200℃，檢測器溫度250℃，氮?dú)鉃檩d氣。柱溫為程序升溫：起始溫度為40℃，保持10min，以10℃/min的速率升溫至150℃，保持8min。結(jié)果本法線性關(guān)系良好，r為0.9976，精密度RSD為1.7%，平均回收率為98%～104%。結(jié)論該方法簡便快速，靈敏度高，可作為蠶蛹提取物中有機(jī)溶劑殘留量的測定方法。
　　
　　【關(guān)鍵詞】頂空氣相色譜法蠶蛹提取物有機(jī)溶劑殘留量
　　
　　【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofresidualorganicsolventsinsilkwormpupaextract.MethodsThesamplesweredissolvedin70%N,N-dimethylformamide.MakeanquantitativeanalysisoftheresidualgasolineinsilkwormpupaextractbyheadspacecapillaryGC,andthechromatographicconditionsadoptedwereHP-1column（30m×0.32mm×0.25μm）,andthedetectorwasFID.Theinjectortemperaturewas200℃,thedetectortemperaturewas250℃.Thecolumntemperaturerosebyprogram,theinitialtemperaturewaskeptat40℃for10min，thetemperaturewasraisedto150℃attherateof10℃/min,maintainfor8min.RusultsTherewasagoodlinearity（r=0.9976）,theRSDofprecisionwas1.7%,theaveragerecoverywasintherangeof98%～104%.ConclusionThemethodissimple，rapidandofhighsensitivity,itisanavailablemethodforthedeterminationofresidualorganicsolventsinsilkwormpupaextract.
　　
　　【Keywords】headspaceGC；silkwormpupaextract；residualorganicsolvents
　　
　　蠶蛹提取物是一種作用廣泛、不良反應(yīng)較少的天然藥物，其主要藥理作用是保護(hù)肝臟、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等[1]。同時(shí)，蠶蛹提取物被廣泛作為保健食品原料藥。蠶蛹提取物由蠶蛹經(jīng)水解并分離純化制得，在生產(chǎn)過程中使用了無鉛汽油脫脂，其主要含有烷烴類化合物及部分芳香族化合物。因此，有必要對蠶蛹提取物中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行檢測，以控制產(chǎn)品的質(zhì)量，樹立品牌優(yōu)勢，同時(shí)適應(yīng)國際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。本文采用頂空進(jìn)樣毛細(xì)管氣相色譜法測定蠶蛹提取物中有機(jī)溶劑的殘留量，方法簡便快捷，分析結(jié)果令人滿意。現(xiàn)報(bào)告如下。
　　
　　1儀器、試劑及樣品
　　
　　Agilent6890N型氣相色譜儀；Agilent7694頂空進(jìn)樣器；Agilent化學(xué)工作站（A.09.01版）；FID檢測器。
　　
　　二甲基甲酰胺為色譜純；97#無鉛汽油為市售；蠶蛹提取物由浙江得恩德制藥有限公司提供，批號分別為0402301、0402302、0402303。
　　
　　2檢測方法
　　
　　2．1頂空條件因二甲基甲酰胺沸點(diǎn)較高，且對極性小的成分溶解度較好，為保證較高的靈敏度，設(shè)定頂空瓶的加熱溫度為85℃，平衡時(shí)間為45min。
　　
　　2．2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)HP-1彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30m×0.32mm×0.25μm）。汽化室溫度200℃，檢測器溫度250℃；氮?dú)鉃檩d氣，分流比為0.2∶1。柱溫為程序升溫：起始溫度為40℃，保持10min，以10℃/min的速率升溫至150℃，保持8min。
　　
　　2.3對照品溶液配制精密稱取汽油對照品適量，加70%N,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液配置成濃度約為20μg/ml的溶液，精密量取此溶液5ml置頂空瓶中，加蓋密封，按上述色譜條件進(jìn)樣，色譜圖見圖1。在所得的色譜圖中，各組分峰的理論塔板數(shù)均大于3000，各個(gè)相鄰峰的分離度均大于1.5。
　　
　　2.4．1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備與線性范圍精密吸取汽油對照品溶液分別制成5.156、10.312、15.468、20.625、25.780μg/ml的溶液，進(jìn)行頂空分析，按上述色譜條件進(jìn)行，測定峰面積。因汽油為混合物，故以峰面積總和進(jìn)行計(jì)算，以峰面積總和為縱坐標(biāo)（Y），以濃度為橫坐標(biāo)（X）作線性回歸，得直線方程為Y=10.049X-10.310，r=0.9976。結(jié)果表明：濃度在5～25μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
　　
　　2.4．2精密度試驗(yàn)取20μg/ml對照品溶液，平行測定5份，記錄色譜圖，結(jié)果峰面積的RSD為1.7%。
　　
　　2.4．3最低檢測限試驗(yàn)用對照品溶液（5.156μg/ml），采取逐步稀釋法,按上述色譜條件進(jìn)行，以汽油中一主峰計(jì)算信噪比。結(jié)果信噪比為3.6時(shí)，最低檢測限為26.3ppm。
　　
　　2.4．4回收率試驗(yàn)精密稱取0402301批樣品約0.05g，置10ml頂空瓶中，精密量取對照品溶液（25.78μg/ml）5ml置頂空瓶中，加蓋密封，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。表1回收率試驗(yàn)結(jié)果
　　
　　2.4．5樣品測定精密稱取3批蠶蛹提取物樣品，各約0.1g，置10ml頂空瓶中，精密加入70%二甲基甲酰胺溶液5ml溶解，加蓋密封。因無鉛汽油為多種成分的化合物，其主要含有烷烴類化合物及部分芳香族化合物，其限度無明確規(guī)定，以正己烷和甲苯為指標(biāo)，參考中國藥典2005年版附錄ⅧP[2]中殘留溶劑的要求，正己烷和甲苯分別為0.029%、0.089%，同時(shí)根據(jù)樣品測定結(jié)果暫定本品含汽油不得過0.015%。按上述色譜條件進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算，即得。結(jié)果3批均未檢出有機(jī)溶劑殘留。
　　
　　3討論
　　
　　3.1色譜條件的選擇由于汽油成分較復(fù)雜，筆者比較了HP-1毛細(xì)管色譜柱、HP-5毛細(xì)管色譜柱、HP-50 毛細(xì)管色譜柱和DB-624毛細(xì)管色譜柱來測定有機(jī)溶劑殘留量時(shí)，發(fā)現(xiàn)HP-1毛細(xì)管色譜柱分離最理想，各組分達(dá)到良好的分離度和柱效。
　　
　　3.2溶劑的選擇由于汽油極性較小，蠶蛹提取物極性相對較大，采用二甲基甲酰胺作為溶劑時(shí)，對照品溶解度較好，而樣品較難溶解，為保證對照品溶液與樣品溶液具有相同的介質(zhì)，比較了不同比例的二甲基甲酰胺溶液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用70%二甲基甲酰胺溶液對對照品及樣品均有較好的溶解度，故選用70%二甲基甲酰胺溶液作溶劑。