熒光物質(zhì)（fluorescentmaterial）又稱為熒光素（fluorescein或luciferin）、熒光色素或熒光探針，是指能夠吸收光并能在較短時(shí)間內(nèi)發(fā)射熒光，而且能作為染料的化合物。熒光素通常具有芳香環(huán)結(jié)構(gòu)。
（1）熒光效率：熒光色素能發(fā)出熒光，除具備合適的能量外，還須具備高熒光效率。熒光效率（fluorescence efficiency）即熒光量子產(chǎn)率，是指熒光物質(zhì)吸收光后發(fā)射出的熒光光量子數(shù)與其所吸收激發(fā)光光量子數(shù)之比。
即 熒光效率=發(fā)射熒光的光量子數(shù)÷吸收光的光量子數(shù)
熒光量子產(chǎn)率數(shù)值反映了熒光物質(zhì)將吸收的光能轉(zhuǎn)化為熒光的效率，其數(shù)值越大。該物質(zhì)的熒光越強(qiáng)，用于熒光分析的熒光物質(zhì)熒光量子產(chǎn)率數(shù)值要求達(dá)到0．35以上。大部分物質(zhì)沒有發(fā)射熒光的性質(zhì)，即使是熒光色素也不能將吸收的全部光轉(zhuǎn)變?yōu)闊晒�，而是在發(fā)射熒光的同時(shí)，或多或少地以其他形式釋放其所吸收的光能：因此，在通常情況下，熒光量子產(chǎn)率數(shù)值總是小于1。
（2）熒光強(qiáng)度：熒光強(qiáng)度（fluorescence intensity）是指熒光色素發(fā)射熒光的光量子數(shù)，決定熒光色素檢測的靈敏度。在一定范圍內(nèi)，激發(fā)光越強(qiáng)．熒光也越強(qiáng)，即熒光強(qiáng)度等于吸收光強(qiáng)度乘以熒光效率。所以，選用適當(dāng)強(qiáng)度的光源作為激發(fā)光源和選用適合于被檢熒光物質(zhì)選擇性吸收的光譜濾片作為激發(fā)濾片，是提高熒光強(qiáng)度的根本方法。
（3）熒光物質(zhì)的吸收光譜和發(fā)射光譜：每種熒光物質(zhì)的吸收光不僅有一定波長。而且在各波長上的吸收量也不同，從而構(gòu)成特殊的吸收光譜曲線；發(fā)射熒光的情況也是如此。因此，熒光物質(zhì)在一定條件下有一定的吸收光譜（激發(fā)光譜）和發(fā)射光譜（熒光光譜），如吖啶橙的吸收光譜（最大吸收波長）是455nm，其發(fā)射波長光譜為450～700nm。因此，吖啶橙與不同細(xì)胞成分結(jié)合后�？僧a(chǎn)生橙、黃、紅、綠等熒光。了解各種熒光染料的吸收光譜和發(fā)射光譜，有利于在觀察被檢標(biāo)本時(shí)，有效地選擇適當(dāng)?shù)臑V片，獲得最好的熒光效果。
（4）熒光穩(wěn)定性：提高激發(fā)光強(qiáng)度固然可以提高熒光強(qiáng)度，但激發(fā)光強(qiáng)度不可能無限提高。因?yàn)榧ぐl(fā)光強(qiáng)度超過一定限度時(shí)光吸收趨于飽和，而且不可逆地破壞激發(fā)態(tài)分子，這種現(xiàn)象稱光漂白。對(duì)于熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡而言，如光源長時(shí)間照射樣品�？蓪�(dǎo)致光漂白現(xiàn)象，嚴(yán)重影響檢測。解決光漂白問題最直接的方法：一是降低光照強(qiáng)度，二是使用抗淬滅劑（anti-fade reagent）。