（一）石蠟切片IGSS

（1）切片脫蠟至水。

（2）0.1%胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修復20min（98℃），自然冷卻至室溫。

（3）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×3min.

（4）l%EA（卵蛋白）15min,不洗。

（5）適當稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.

（6）0.05m01/L（pH7.4）TBS洗3×5min.

（7）0.02m01/L（pH7.4）TBS（內(nèi)含0.1%BSA）洗10min.

（8）1%EA 15min,不洗，1:10~1:20稀釋的PAGlonm室溫孵育1h,或37℃孵育30min.

（9）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗10min.

（10）1%戊二醛洗10min.

（11）雙蒸水洗5min.

（12）1%明膠洗5min.

（13）銀避光顯影8~15min.

（14）雙蒸水洗15min.

（15）固定：用顯影定影液（1:4或1:10）固定5min,也可以用15%硫酸鈉-20%硫代硫酸鈉混合液固定1~3min,或用1%戊二醛固定5min,50℃溫水洗3~6min.

（16）襯染，核固紅襯染3min或甲基綠襯染3min.

（17）常規(guī)脫水，二甲苯透明，常規(guī)樹膠封片。

（18）鏡檢：陽性物質(zhì)呈黑色或黑褐色，顆粒分布于抗原-抗體反應部位；背景較干凈，呈紅色。

胃未分化癌IGSS-P53              HCC IGSS-HBsAg
核內(nèi)內(nèi)呈黑色陽性表達，背景為紅色，×400    細胞漿內(nèi)呈黑色陽性，×200

（二）冰凍切片IGSS

做冰凍切片的組織可先經(jīng)過固定再作切片，也可先制作冰凍切片，然后再固定。這要根據(jù)保存抗原的需要而定，固定過的組織可用含20%蔗糖的 PBS（0.1mol/L,pH7.4）浸泡過夜，使切片減少冰結(jié)晶，保持組織細胞良好的形態(tài)結(jié)構(gòu)。切片人0.05mol/L（pH7.4）TBS洗 3×3min,染色步驟同石蠟切片。