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公司動態(tài)

標(biāo)題ELISA試劑盒實驗步驟

發(fā)布時間：2023/11/8  來源: 上海篤瑪生物科技有限公司   閱讀次數(shù)：132        


一、實驗原理

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是一種基于抗原-抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測方法，通過酶與抗體或抗原的結(jié)合，將抗原-抗體反應(yīng)的特異性、敏感性和可重復(fù)性提高。ELISA試劑盒通常包含包被有特異性抗體的微型板、酶標(biāo)記的特異性抗體、酶底物等。

二、實驗步驟

1. 酶標(biāo)板設(shè)置

將ELISA試劑盒中的酶標(biāo)板放置在實驗臺上，將不用的孔用封口膜封住，防止污染。根據(jù)實驗設(shè)計，將特異性抗體包被在酶標(biāo)板上，設(shè)立陰性對照、陽性對照等。

2. 加樣

根據(jù)實驗設(shè)計，用移液器將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加入相應(yīng)的孔中，加入樣品時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。加樣時應(yīng)緩慢而謹慎，避免在孔壁上產(chǎn)生泡沫。每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)設(shè)復(fù)孔，每個孔加入樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的體積應(yīng)相同。

3. 孵育

將酶標(biāo)板在37℃下孵育一定時間，使抗原-抗體充分結(jié)合。孵育時間根據(jù)試劑盒說明書而定，一般約為1小時至數(shù)小時不等。孵育時應(yīng)保證酶標(biāo)板垂直放置，以免液體溢出。

4. 洗滌

將酶標(biāo)板輕輕搖動，使未結(jié)合的抗原-抗體結(jié)合物從孔中沖洗掉。洗滌時應(yīng)保證每個孔中的液體完全流出，避免殘留。洗滌次數(shù)根據(jù)試劑盒說明書而定，一般為2-3次。

5. 加酶標(biāo)物

根據(jù)試劑盒說明書，將酶標(biāo)記的特異性抗體加入相應(yīng)的孔中，加入時應(yīng)緩慢而謹慎，避免在孔壁上產(chǎn)生泡沫。每個孔加入的酶標(biāo)物體積應(yīng)相同。

6. 孵育

將酶標(biāo)板在37℃下孵育一定時間，使酶標(biāo)記的特異性抗體與抗原充分結(jié)合。孵育時間根據(jù)試劑盒說明書而定，一般約為30分鐘至1小時不等。孵育時應(yīng)保證酶標(biāo)板垂直放置，以免液體溢出。

7. 洗滌

將酶標(biāo)板輕輕搖動，使未結(jié)合的酶標(biāo)記特異性抗體從孔中沖洗掉。洗滌時應(yīng)保證每個孔中的液體完全流出，避免殘留。洗滌次數(shù)根據(jù)試劑盒說明書而定，一般為2-3次
。
8. 加底物

根據(jù)試劑盒說明書，將底物溶液加入相應(yīng)的孔中，加入時應(yīng)緩慢而謹慎，避免在孔壁上產(chǎn)生泡沫。每個孔加入的底物體積應(yīng)相同
。
9. 終止反應(yīng)

在適當(dāng)時間后，根據(jù)試劑盒說明書加入終止液，使反應(yīng)停止。終止液的加入量應(yīng)按照說明書要求進行。

10. 檢測

用酶標(biāo)儀檢測各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)并進行分析。通常采用450nm波長進行檢測，但具體波長根據(jù)試劑盒說明書而定。

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