細(xì)胞因子在淋巴細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用，它可以調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和功能，調(diào)節(jié)正常與病理狀態(tài)下的免疫應(yīng)答。研究生理或病理免疫調(diào)節(jié)因素導(dǎo)致細(xì)胞因子合成的應(yīng)答與改變是探尋疾病病因與免疫狀態(tài)關(guān)系的重要工具。本實(shí)驗(yàn)采用優(yōu)化的一管 8 色的多色檢測(cè)方案對(duì)人外周血 T 細(xì)胞亞群的 IFN-γ、IL-17、 顆粒酶、穿孔素表達(dá)情況進(jìn)行了研究。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖上可看出，本實(shí)驗(yàn)在 CytoFLEX 上檢測(cè)時(shí)各細(xì)胞群體分群明顯，檢測(cè)結(jié)果確切可信，能夠非常漂亮地完成此類實(shí)驗(yàn)。

▶ 試劑

▶ 樣品制備

Sample Type	外周血單個(gè)核細(xì)胞
Species	人
Age of specimen	樣本染色后 1 h 之內(nèi)完成上機(jī)檢測(cè)
Prep Method	1. 取 200 ul 全血加 200 ul1640，并加入適量 PMA 等試劑，刺激 4 h； 2. 混勻后去 100 ul 刺激后的標(biāo)本并加入相應(yīng)膜抗，室溫避光孵育 20 min； 3. 加固定液，孵育后離心去上清； 4. 加入適量生理鹽水，1500 rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 min 去除上清液； 5. 加破膜液混勻，并加入相應(yīng)胞漿抗體適量，混勻后室溫避光，孵育 20 min； 6. 加入適量生理鹽水，1500 rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 min 去除上清液； 7. 重復(fù) 6； 8. 加入 300-500 ul 預(yù)冷的 PBS，混勻后上機(jī)檢測(cè)。

數(shù)據(jù)分析

使用 CD45/SSC 設(shè)門，選取淋巴細(xì)胞群（設(shè)邏輯門排除掉混雜的單核細(xì)胞），然后再取 CD3+T 淋巴細(xì)胞；分 別分析 Th 細(xì)胞與 TS 細(xì)胞的相關(guān)因子的表達(dá)情況。

 

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果