培養(yǎng)液 pH 值變化太快
可能原因:1,CO2 張力不對。
2,培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。
3,NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。,
4,培養(yǎng)液中鹽濃度不正確
5,細菌、酵母或真菌污染
建議解決方法:1)按培養(yǎng)液中 NaHCO3 濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 濃度,2.0g/L 到 3.7g/L 濃度 NaHCO3 對應 CO2 濃度為 5% 到 10%。
2)改用不依賴 CO2 培養(yǎng)液。
松開瓶蓋 1/4 圈。
3)加 HEPES 緩沖液至 10 到 25mM 終濃度。
在 CO2 培養(yǎng)環(huán)境中改用基于 Earle′s 鹽配制的培養(yǎng)
液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用 Hanks 鹽配制的培養(yǎng)
液。
4)丟棄培養(yǎng)物。
5)或用抗生素除菌。
可能原因:1,培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,但pH值不變
,2,用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來,
3,可能原因:冰凍保存培養(yǎng)液 用去離子水反復沖洗玻璃器皿,然后除菌。
將培養(yǎng)液加熱到 37℃,搖動使其溶解如沉淀仍然存在,
丟棄培養(yǎng)液。
培養(yǎng)細胞死亡
可能原因:1,培養(yǎng)箱內(nèi)無 CO2,2,培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大,3,細胞凍存或復蘇過程中損傷,4,培養(yǎng)液滲透壓不正確,5,培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積,6,檢測培養(yǎng)箱內(nèi) CO2
建議解決方法:1)檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度
2)取新的保存細胞種
3)檢測培養(yǎng)液滲透壓。注意:大多數(shù)哺乳動物細胞能耐受
4)滲透壓為 260 – 350 mOsm/kg。加入額外試劑如 HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。
5)換入新鮮培養(yǎng)液