
您的位置:首頁 > 公司動態(tài) >上海遠慕生物科技有限公司 >遠慕生物詳細(xì)介紹:質(zhì)粒載體的基本特征與分類
發(fā)布時間:2018/8/7 來源: 上海遠慕生物科技有限公司 閱讀次數(shù):272
質(zhì)粒載體是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上為適應(yīng)實驗室操作而進行人工構(gòu)建的質(zhì)粒。與天然質(zhì)粒相比,質(zhì)粒載體通常帶有一個或一個以上的選擇性標(biāo)記基因(如抗生素抗性基因)和一個人工合成的含有多個限制性內(nèi)切酶識別位點的多克隆位點序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量盡可能減少,以便于基因工程操作。
質(zhì)粒(plasmid)是細(xì)菌或細(xì)胞染色質(zhì)以外的,能自主復(fù)制的,與細(xì)菌或細(xì)胞共生的遺傳成分。其特點如下:
是染色質(zhì)外的雙鏈共價閉合環(huán)形DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),可自然形成超螺旋結(jié)構(gòu),不同質(zhì)粒大小在2-300kb之間,<15kb的小質(zhì)粒比較容易分離純化,>15kb的大質(zhì)粒則不易提取。
質(zhì)粒分為嚴(yán)緊型和松弛型復(fù)制。
根據(jù)質(zhì)粒DNA復(fù)制與宿主之間的關(guān)系或在宿主細(xì)胞的拷貝數(shù)的多少,可以將質(zhì)粒分為兩種不同的復(fù)制類型:嚴(yán)緊型和松弛型。嚴(yán)緊型質(zhì)粒復(fù)制受宿主染色體DNA復(fù)制的嚴(yán)格控制,拷貝數(shù)較小一般只有1~3個拷貝。疏松型質(zhì)粒的復(fù)制宿主的控制比較松,在宿主中的拷貝數(shù)比較多,一般有10~200個拷貝,有時可達到700個。
按基因轉(zhuǎn)移性:
分兩類:
(1)傳遞性質(zhì)粒:常為大型、嚴(yán)緊型質(zhì)粒;
(2)非傳遞性質(zhì)粒:多為小型、松弛型質(zhì)粒。
按遺傳性狀、產(chǎn)物分類:
(1)抗生素抗性:如氨芐西林、氯霉素抗性;
(2)限制酶-修飾酶(R-M)系統(tǒng):如hsdR-菌株可使DNA甲基化,但不限制外源DNA;hsd-菌株為限制和甲基化雙缺陷型。
人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體分類:
高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體:
ColE1、pMB1派生質(zhì)粒具有高拷貝數(shù)的特點。適合大量增殖克隆基因,或需要大量表達的基因產(chǎn)物。
低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體:
由 pSC101派生來的載體特點是分子量小的拷貝數(shù)。它有特殊的用途:當(dāng)有些被克隆的基因的表達產(chǎn)物過多時會嚴(yán)重影響寄主菌的正常代謝活動,導(dǎo)致寄主菌的死亡時,就需要低拷貝的載體。
失控的質(zhì)粒載體
這是一類溫度敏感型復(fù)制控制質(zhì)粒。如pBEU1、 pBEU2。
插入失活型克隆載體。載體的克隆位點位于其某一個選擇性標(biāo)記基因內(nèi)部。如pDF41、pDF42。
正選擇的質(zhì)粒載體
直接選擇轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞。只有帶有選擇標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)化菌細(xì)胞才能在選擇培養(yǎng)基上生長。
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