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公司動(dòng)態(tài)

標(biāo)題Cell Counting Kit (CCK-8)細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)更輕松

發(fā)布時(shí)間:2017/3/2  來(lái)源: 武漢艾美捷科技有限公司   閱讀次數(shù):281        

   很多的科研的同學(xué)需要做增殖細(xì)胞增殖相關(guān)實(shí)驗(yàn),而且想讓自己的實(shí)驗(yàn)比較有說(shuō)服力,不少童鞋都是有請(qǐng)教大神做哪種實(shí)驗(yàn)的好,是CCK-8、WST-1、MTT法、XTT法哪種實(shí)驗(yàn)比較有說(shuō)服力?這時(shí)候問(wèn)題就來(lái)了為什么將Cell Counting Kit (CCK-8)作為細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)最佳選擇?看過(guò)來(lái)人的經(jīng)驗(yàn)之談。

  Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

  實(shí)驗(yàn)原理:
WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
CCK8-Figure

  為什么將Cell Counting Kit (CCK-8) 作為細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)最佳選擇:
 
  如下表,CCK-8法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)比較,結(jié)果不言而喻!

檢測(cè)方法 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK-8法
甲臜產(chǎn)物的水溶性 差(需加有機(jī)溶劑溶解后再檢測(cè))
產(chǎn)品性狀 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 現(xiàn)配現(xiàn)用 即開(kāi)即用 即開(kāi)即用
檢測(cè)靈敏度 很高 很高
檢測(cè)時(shí)間 較長(zhǎng) 較短 較短 最短
檢測(cè)波長(zhǎng) 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
細(xì)胞毒性 高,細(xì)胞形態(tài)完全消失 很低,細(xì)胞形態(tài)不變 很低,細(xì)胞形態(tài)不變 很低,細(xì)胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性 一般 較差 一般 很好
批量樣品檢測(cè) 可以 非常適合 非常適合 非常適合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷
* 細(xì)胞毒性非常低,因此加入WST-8顯色后,可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到最佳測(cè)定時(shí)間
* 酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾(扣除空白孔即可)
產(chǎn)品名稱及描述 貨號(hào) 產(chǎn)品說(shuō)明
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) KTC011001 詳情
  CCK-8法細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)

1、在96孔板中配置100 μl 的細(xì)胞懸液(2000-5000 cells)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(37℃,5% CO2)。
2、向培養(yǎng)板加入10 μl 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6、12、24或48小時(shí))。
4、向每孔加入10 μl CCK-8溶液(不要讓孔中生成氣泡,它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
6、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。

注:若暫時(shí)不測(cè)定OD值,可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,吸光度不會(huì)發(fā)生變化。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

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