Figure.1 CCK-8（WST-8）反應機制

實驗原理：

WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數(shù)量。

用途：

CCK-8法應用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增  殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。

為什么將Cell Counting Kit (CCK-8) 作為細胞增殖與毒性檢測最佳選擇：

• 如下表，CCK-8法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較，結果不言而喻！

* 細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數(shù)從而找到最佳測定時間

* 酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾（扣除空白孔即可）

如何選擇合適的CCK-8檢測試劑盒？

目前市面上能提供的【CCK-8】細胞增殖／毒性檢測試劑盒有國產(chǎn)分裝或原產(chǎn)的，國產(chǎn)分裝的CCK-8試劑盒在質量穩(wěn)定性上有不足。而原產(chǎn)于國內(nèi)實驗室的CCK-8試劑盒有些具有較好的檢測結果，在批次之間的穩(wěn)定性上較難控制。至于原裝進口供應CCK-8試劑盒的進口品牌并不多，就連Abcam、Thermo，Sigma等等幾個品牌都不能夠提供CCK-8試劑盒，而其它品牌在性價比上遠遜于Abbkine產(chǎn)品。

作為Abbkine品牌旗下首款細胞分析旗艦產(chǎn)品，Cell Counting Kit (CCK-8)，Abbkine研發(fā)工程師為其傾注了大量的投入，不斷摸索優(yōu)化最佳的配方，每一份努力只為讓科研工作者更加簡單，高效，穩(wěn)定地獲取珍貴的科研數(shù)據(jù)。

本試劑盒檢測非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無須再進行任何配制等操作 。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan�？梢杂糜诖笈�量樣品的檢測。

《【CCK-8】細胞增殖／毒性檢測試劑盒綜合對比》

實驗注意事項：

• 建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
• 有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會干擾OD值讀數(shù)。
• 白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
• 當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。
• 如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度最高。
• 如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。當然藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

更多詳情：請瀏覽下方鏈接

CCK-8實驗操作指南：http://www.docin.com/p-1853035994.html

CCK-8常見問題匯總：http://www.docin.com/p-1853035993.html

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