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發(fā)布時間:2011/12/23 來源:易推廣 閱讀次數(shù):118
血漿中多肽的分離鑒定對于疾病標(biāo)志物的篩選和早期診斷具有重要意義。然而,血漿復(fù)雜的成分組成和多肽、蛋白質(zhì)極高的含量動態(tài)范圍,對內(nèi)源性多肽的高效富集和分離鑒定形成了巨大的困難。中科院大連化學(xué)物理研究所鄒漢法、吳仁安研究員等人采用該所張濤研究員研究組所制備的碳介孔材料(OMC),成功發(fā)展了血漿中內(nèi)源性多肽的高選擇性富集與分離鑒定的新方法。該項(xiàng)成果作為VIP論文發(fā)表在Angewandte Chemie-International Edition上。
碳介孔材料(OMC) 具有高度的有序性、孔分布和很強(qiáng)的疏水性表面,由于蛋白質(zhì)等生物大分子(≥15000 Da)與多肽分子(≤10000 Da)的體積差異,通過體積排阻效應(yīng)可以將蛋白質(zhì)等生物大分子排阻在介孔外無法得到有效的吸附,而低分子量的多肽被可以進(jìn)入介孔內(nèi)獲得有效的吸附,從而在高度復(fù)雜的血漿中實(shí)現(xiàn)內(nèi)源性多肽的高效率、高選擇性富集。
研究人員選擇BSA (bovine serum albumin)酶解的多肽作為標(biāo)準(zhǔn)樣品考察OMC的吸附性能,發(fā)現(xiàn)其富集多肽的效果與常用的C18固相萃取柱的吸附效果相當(dāng);但與C18固相萃取方法相比較,OMC富集方法進(jìn)一步引入了體積排阻作用,能較好地消除血漿中蛋白質(zhì)等生物大分子對多肽吸附的干擾。將所建立的富集方法應(yīng)用于血清中內(nèi)源性多肽的富集,所富集的多肽由多維色譜-高分辨質(zhì)譜(2D LC-MS/MS)分離鑒定,可在3mL血清中鑒定到790個非冗余多肽,比現(xiàn)有的方法提高了2-3倍;進(jìn)一步應(yīng)用于20μl血清中內(nèi)源性多肽的分離分析,共鑒定了3402個內(nèi)源性血漿多肽,這是目前血清中內(nèi)源肽的最高靈敏度的富集鑒定策略。
這一結(jié)果充分表明,OMC富集血清中的內(nèi)源性多肽具有極高的效率,有利于實(shí)現(xiàn)微量樣品中多肽的高效、高選擇性分離鑒定。該新方法可以廣泛應(yīng)用于其它生物樣品中多肽的分離鑒定,為闡明疾病發(fā)生的機(jī)制和標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)提供了新的分析策略和途徑。
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