一般描述
Sigma′s GenElute哺乳動(dòng)物總RNA小量制備試劑盒提供了一種從哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織中分離總RNA的簡(jiǎn)單便捷方法。提供了細(xì)胞，組織和纖維組織的方案。這些方案的細(xì)胞裂解和破壞條件不同。一旦RNA結(jié)合到GenElute結(jié)合柱上，所有起始物料的純化程序都是相同的。對(duì)于纖維組織，試劑盒必須與蛋白酶K（目錄號(hào)P4850）一起使用，以確保有效的細(xì)胞破碎。 該試劑盒結(jié)合了基于二氧化硅和微針形式的優(yōu)點(diǎn)，無(wú)需使用氯化銫梯度、酒精沉淀和有害的有機(jī)化合物，如苯酚。細(xì)胞或組織在含有硫氰酸胍的緩沖液中裂解和勻漿，以確保
大分子變性和RNase失活。當(dāng)裂解物在微量離心管中通過(guò)二氧化硅膜旋轉(zhuǎn)時(shí)，乙醇的加入會(huì)導(dǎo)致RNA結(jié)合。 洗滌去除污染物后，在50-100 μL洗脫液中洗脫RNA。 在不到30分鐘的時(shí)間內(nèi)可以分離出多達(dá)150 μg的總RNA。
如果必須消除所有痕量的DNA污染，建議用DNase I進(jìn)一步處理。當(dāng)RNA與GenElute結(jié)合柱結(jié)合時(shí)，可使用柱上DNase I消化裝置（DNASE10和DNASE70）進(jìn)行DNase I消化�；蛘�，為了更嚴(yán)格地去除污染的DNA，可以用擴(kuò)增DNase I（AMPD1）處理終的RNA制劑。
Sigma Life Science于為您提供符合一項(xiàng)或多項(xiàng)綠色化學(xué)十二條原則 （The 12 Principles of Greener Chemistry），更環(huán)保的替代產(chǎn)品。相對(duì)于使用苯酚和進(jìn)行DNA提取的標(biāo)準(zhǔn)方法，本產(chǎn)品符合固有安全化學(xué)原則(Inherently Safer Chemistry)。
應(yīng)用
GenElute
™ Mammalian Total RNA Miniprep Kit has been used to extract total RNA from tissues ａnd cells.
[1][2][3]純化的RNA可用于逆轉(zhuǎn)錄和PCR，標(biāo)記和微陣列分析以及其他常見(jiàn)應(yīng)用。請(qǐng)注意，在該試劑盒使用的條件下，長(zhǎng)度短于200個(gè)核苷酸的RNA（例如tRNA，5S rRNA和5.8S rRNA）無(wú)法有效回收。
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)
- 從每個(gè)制備物中純化多達(dá)107個(gè)細(xì)胞或40 mg組織中的總RNA
- 每次制備多可產(chǎn)生150 μg純的濃縮總RNA
- 從少至100個(gè)細(xì)胞中回收RNA
- 簡(jiǎn)單-30分鐘內(nèi)制備12-18次
- 比重力流陰離子交換方法快
- 沒(méi)有與樹(shù)脂和磁漿相關(guān)的繁瑣步驟
- 每個(gè)試劑盒的純化比先供應(yīng)商多40%
其他說(shuō)明
GenElute™哺乳動(dòng)物總RNA純化試劑盒將硅膠膜技術(shù)與方便的旋轉(zhuǎn)柱形式相結(jié)合，以快速結(jié)合，洗滌和洗脫的方法制備高質(zhì)量的總RNA。
原理
將樣品裂解并在硫氰酸胍和中勻漿以釋放RNA并滅活RNase。裂解物通過(guò)過(guò)濾柱旋轉(zhuǎn)以去除細(xì)胞碎片和剪切DNA。然后將濾液加到高容量硅膠柱上以結(jié)合總RNA，然后洗滌和洗脫。每個(gè)制備液在100 μl水中多可回收150 μg總RNA。純化的RNA準(zhǔn)備用于印跡雜交（圖1），RT-PCR（圖2）和其他常見(jiàn)應(yīng)用。
法律信息
GenElute is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC
