雙夾心ELISA：此法與雙夾心ELISA的主要區(qū)別在于：它是采用酶標(biāo)抗檢查多種大分子抗原，它不僅不必標(biāo)記每一種，還可試驗(yàn)的性。此法的基本程序?yàn)椋孩?加（Ab-1）包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加用非同種動(dòng)物生產(chǎn)的特（Ab-2)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加入酶標(biāo)抗Ab-2（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑥ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

ELISA檢劑盒應(yīng)用定性?shī)A心檢測(cè)技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過(guò)氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng) 次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與 次孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,加入溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。

兔纖連蛋白富亮氨酸跨膜蛋白2(FLRT2)ELISA試劑盒 29

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或的固相化及抗原或的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或仍保持其學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或既保留其學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的或抗原)與固相載體表面的抗原或起反應(yīng)。用洗滌的使固相載體上形成的抗原復(fù)合物與中的其他分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定達(dá)到很高的度。 ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定。

一、、靈敏、特異的;二、的重復(fù)性和可靠性;三、吸附性能好,空白值低,孔底度高的固相載體;四、適用、、組織勻漿液、細(xì)胞上清液、等等多種標(biāo)本類型;五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標(biāo)液1PPM,就是1毫克/升,而作出數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說(shuō)你的回收率是99%,這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系,說(shuō)明的準(zhǔn)確度。比如水中總無(wú)機(jī)氯含量測(cè)定,樣品水中含有無(wú)機(jī)氯20mg/L,取100mL被測(cè)水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機(jī)氯樣品,測(cè)定時(shí)忽略體積變化,如果測(cè)定出樣品中無(wú)機(jī)氯為29.8mg/L,則認(rèn)為回收率為99%。

試劑盒組成：自備物品1. 酶標(biāo)儀（450nm）2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱

辣根過(guò)氧化物酶：過(guò)氧化物酶（HRP）廣泛分布于植物中，辣根中含，從辣根中提取的稱辣根過(guò)氧化物酶（HRP），是由無(wú)色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構(gòu)成的一種糖蛋白（含糖量18%），分子量約40 000，約由300個(gè)酸組成，等電點(diǎn)為pH 3-9，催化反應(yīng)的適pH值因供氫體不同而稍有差異，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的銨溶液。酶蛋白和輔基吸收光譜分別為275nm和403nm。