采用熒光法測定ADR，考察了操作液成分和pH值對測定的影響。實驗結(jié)果表明：BSA濃度200mg/L，ADR濃度2．0u/mL，pH2．40，NaCl濃度0．5mol/L，氣體流速15mL/min，進料體積8．0mL時，阿霉素的二次提取率可達70．3%。并且對其作用機理進行了討論，ADR實現(xiàn)泡沫提取的主要動力是ADR的疏水部分與BSA分子間發(fā)生的疏水作用力。

方法

利用CTAB/正辛醇：
三氯甲烷(4：1V/V)反膠團體系對牛血清白蛋白(BSA)進行相轉(zhuǎn)移中，通過對萃取體系水相的pH值、離子強度、兩液相的體積比、小分子糖(葡萄糖、蔗糖)及助表面活性劑(直鏈醇分子)等因素的改變，探討了BSA在陽離子表面活性劑體系的萃取機理；
研究結(jié)果表明選擇合適的條件提取BSA時，萃取率可達到97%，反萃率達到了85%；找到實現(xiàn)牛血清白蛋白分離提純的有效方法。
1、標準曲線測定法
分別取六只試管，其中一只加入1.0ml蒸餾水做空白，5只分別加入不同體積的濃度為100ug/ml牛血清清蛋白標準液，補充水到1.0ml。然后每只試管加入5.0ml考馬斯亮藍G-250試劑，搖勻放置5min，在紫外-可見分光光度計595nm處測定吸光值。以A595吸光值為縱坐標，牛血清清蛋白的ug數(shù)量為橫坐標繪制標準曲線。具體操作見下表。
蛋白質(zhì)標準曲線測定加樣
試劑空白12345
100ug/ml牛血清清蛋白/ml1.00.10.20.40.60.8
牛血清清蛋白/ug01020406080
去離子水/ml00.90.80.60.40.2
考馬斯亮藍G-250試劑/ml5.05.05.05.05.05.0
吸光值A595
2、蛋白樣品
配制濃度約100ug/ml的待測蛋白質(zhì)溶液。取一只試管加入1.0ml蒸餾水做空白，一支加入0.5ml待測蛋白質(zhì)溶液，補充水到1.0ml。然后每支試管加入5.0ml考馬斯亮藍G-250試劑，搖勻放置5min后，在紫外-可見分光光度計595nm處測定吸光值。用測得的吸光值從標準曲線上查得相當于牛血清清蛋白的ug數(shù)量，計算出待測蛋白質(zhì)的含量。
在標準蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)樣品的測定時，為了減小誤差，每一個濃度的蛋白質(zhì)做3支平行管。
3、試劑配置
牛血清清蛋白標準液結(jié)晶牛血清清蛋白或酪蛋白，預先經(jīng)微量凱氏定氮法標定該蛋白質(zhì)的百分含量或者根據(jù)牛血清清蛋白的消光系數(shù)是6.6來計算其百分含量。然后根據(jù)該蛋白的純度配置成濃度為100ug/ml的蛋白溶液。



 

 

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