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兔骨成型蛋白受體II(BMPR2) ELISA 試劑盒
實(shí)驗原理
ELISA運(yùn)用了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色原理，需要將抗原或抗體預(yù)包被在固相載體表面，使后來形成的抗原-抗體-酶 (熒光基團(tuán)) -底物復(fù)合物黏附在載體上，通過檢測OD值或發(fā)光值，來檢測靶蛋白的含量。
實(shí)驗所需自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
試劑盒組成
| 名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
| 微孔酶標(biāo)板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5mL | 0.5mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
| 檢測抗體-HRP | 6mL | 3mL | 無 |
| 20×洗滌緩沖液 | 20mL | 20mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
| 底物 A | 6mL | 3mL | 無 |
| 底物 B | 6mL | 3mL | 無 |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無 |
| 說明書 | 1 份 | 1 份 | 無 |
| 自封袋 | 1 個 | 1 個 | 無 |
操作步驟
1. 準(zhǔn)備工作：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使試劑盒恢復(fù)至室溫。同時準(zhǔn)備好實(shí)驗所需的材料和器具。
2. 加樣：在酶標(biāo)板的弟1個孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL，然后在后續(xù)的孔中依次加入待測樣本50μL。
3. 溫育：將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。
4. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
5. 加酶：在每個孔中加入酶標(biāo)物100μL。
6. 溫育：再次將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。
7. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
8. 加底物：在每個孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。
9. 終止反應(yīng)：在每個孔中加入終止液50μL。
10. 檢測：用酶標(biāo)儀在450nm波長下讀取各孔的吸光度（OD值）。
結(jié)果分析
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計算出樣本中角蛋白1（KRT1）的濃度。具體分析方法可參考試劑盒說明書或相關(guān)文獻(xiàn)。
注意事項
1. 在操作過程中，應(yīng)保持酶標(biāo)板的干燥，避免水分進(jìn)入孔內(nèi)。
2. 加樣時需確保加樣準(zhǔn)確、無氣泡產(chǎn)生。
3. 溫育和洗滌過程中需嚴(yán)格控制時間和溫度，確保實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 在使用酶標(biāo)儀讀取OD值時，需確保波長設(shè)置正確，避免誤差產(chǎn)生。
5. 在整個實(shí)驗過程中，需保持操作環(huán)境的清潔和整潔，避免交叉污染。
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