產(chǎn)品縮寫：MQCA 版本：2016.1
齊一生物科技（上海）有限公司
喹乙醇代謝物檢測試劑盒
使用說明書
（酶聯(lián)免疫法）
1 原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織樣本中的喹乙
醇代謝物（methyl-3-quinoxaline-2-car-boxylic acid ，
MQCA），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、
標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。 檢測時， 加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，
樣本中的喹乙醇代謝物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗喹
乙醇代謝物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB 底物顯色，樣本吸
光度值與其所含喹乙醇代謝物含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較
即可得出樣本中喹乙醇代謝物的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度：0.3ppb（ng/ml）
2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min
2.3 檢測下限：
肌肉………………………………………0.5ppb
豬肝………………………………………1ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
喹乙醇代謝物（MQCA）………………100%
喹噁啉-2-羧酸（QCA）……………＜1.0%
喹乙醇…………………………………＜1.0%
脫二氧喹乙醇…………………………＜1.0%
喹烯酮…………………………………＜1.0%
脫二氧喹烯酮…………………………＜1.0%
乙酰甲喹………………………………＜1.0%
2.5 樣本回收率：
組織…………………………………………85±25%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)品（黑蓋）：各 1ml
0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb
高標(biāo)準(zhǔn)品（黑蓋）：100ppb…………1ml
酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………11ml
抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml
底物液 A（白蓋）……………………6ml
底物液 B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20X 濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
2X復(fù)溶液（黃蓋）…………………50ml
說明書………………………………1 份
4 需要的器材和試劑
4.1
儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩
器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量 0.01g）
4.2 微量移液器： 單道 20µl-200µl， 100µl-1000µl、 多道300µl
4.3 試劑：乙酸乙酯、濃鹽酸、NaCl、正己烷
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實
驗結(jié)果。
5.2 配液：
配液 1：1.5M HCl
取濃鹽酸 40ml 緩慢加至 280ml 去離子水中，混勻，室溫
保存。
配液 2：33.3% NaCl
稱取氯化鈉 100g加入蒸餾水 300ml，加熱溶解，混勻，室
溫保存。
配液 3：復(fù)溶液
將 2×復(fù)溶液用去離子水 2倍稀釋，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)
溶液在 4℃環(huán)境可保存一個月。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 肌肉（豬、雞、魚、蝦）樣本
1）稱取 2±0.05g去除脂肪的勻漿樣品，加入乙酸乙酯 8ml，
渦旋5秒使基質(zhì)分散 （不要渦旋太久， 否則有一定的基質(zhì)干擾） ，
加入1.5M HCl 4 ml， 渦旋振蕩3min， 室溫4000r/min離心10min；
（加入乙酸乙酯稍微渦旋之后應(yīng)立即加入鹽酸，并立即渦旋。
否則組織會成為團(tuán)狀，影響提取結(jié)果。當(dāng)加入鹽酸渦旋之后，
會出現(xiàn)糊糊狀，則為正常狀態(tài)，持續(xù)渦旋 2min 即可。）
2） 取上層乙酸乙酯 5ml于另一離心管中， 加入33.3% NaCl 3ml，
渦旋 30s，靜止待分層；
3）取上層乙酸乙酯 4ml于潔凈玻璃試管中，于 50-60℃氮氣或
空氣下吹干；
4）用 1ml正己烷溶解干燥物，渦旋 1min后加 1X復(fù)溶液 1ml，
充分混勻，室溫 4000r/min以上離心 5min；（若出現(xiàn)太多泡沫
或者膠狀物難以取足夠的下清液， 請將樣品瓶于80℃水浴5min
后再離心。）
5）去除上層有機(jī)相，取下層液 50ul用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1 檢測下限：0.5ppb
5.3.2豬肝樣本
1）稱取 2±0.05g去除脂肪的勻漿樣品，加入乙酸乙酯 8ml，
渦旋5秒使基質(zhì)分散 （不要渦旋太久， 否則有一定的基質(zhì)干擾） ，
加入1.5M HCl 4 ml， 渦旋振蕩3min， 室溫4000r/min離心10min；
（加入乙酸乙酯稍微渦旋之后應(yīng)立即加入鹽酸，并立即渦旋。
否則組織會成為團(tuán)狀，影響提取結(jié)果。當(dāng)加入鹽酸渦旋之后，
會出現(xiàn)糊糊狀，則為正常狀態(tài)，持續(xù)渦旋 2min 即可。）
2） 取上層乙酸乙酯 5ml于另一離心管中， 加入33.3% NaCl 3ml，
渦旋 30s，靜止待分層；
3）取上層乙酸乙酯 2ml于潔凈玻璃試管中，于 50-60℃氮氣或產(chǎn)品縮寫：MQCA 版本：2016.1
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空氣下吹干；
4）用 1ml正己烷溶解干燥物，渦旋 1min后加 1X復(fù)溶液 1ml，
充分混勻，室溫 4000r/min以上離心 5min；（若出現(xiàn)太多泡沫
或者膠狀物難以取足夠的下清液， 請將樣品瓶于80℃水浴5min
后再離心。）
5）去除上層有機(jī)相，取下層液 50ul用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：2 檢測下限：1ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從 4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min
以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，
每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框
架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。
實驗開始前，用去離子水將 20×濃縮洗滌液按20倍稀釋
成工作洗滌液。
6.1 編 號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本
和標(biāo)準(zhǔn)品做 2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然
后加抗體工作液 50µl/孔，輕輕振蕩 5秒混勻，25℃避光反應(yīng)
30分鐘。
6.3 洗 滌：將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分
洗滌 5次，每次間隔 30秒，最后用吸水紙拍干（拍干后未被
清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 加酶反應(yīng)：加酶標(biāo)記物100µl/孔，25℃避光反應(yīng) 30分鐘。
6.5 洗 滌：同上
6.6 顯 色：加底物液 A 50µl/孔，再加底物液 B 50µl/孔，
輕輕振蕩 5秒混勻，25℃避光顯色 15分鐘。
6.7 終 止：加終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.8 測吸光值：用酶標(biāo)儀于 450nm處測定每孔吸光度值（建議
用雙波長 450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后 10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸
光度值的平均值（雙孔）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度
值，再乘以 100%，即
百分吸光度值（%）＝ A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）
的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分
吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃
度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣本的
準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索�。�
8 注意事項
8.1 室溫低于 25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導(dǎo)致
所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲
線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行
下一步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在 ELISA分析中的再現(xiàn)性，很
大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過程中， 用蓋板膜封住微孔板， 避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試
劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光
度值小于 0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件：試劑盒于 2-8℃保存，避免冷凍。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
【生產(chǎn)企業(yè)】
企業(yè)名稱：齊一生物科技（上海）有限公司
