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齊一生物科技（上海）有限公司 第1頁(yè)
脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）活性試劑盒說(shuō)明書(shū)
For Research Use only
僅供研究用
貨號(hào)：QYS-231059
紫外分光光度法：10 管/9 樣
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
FAS 是脂肪酸合成關(guān)鍵酶，催化乙酰輔酶 A 和丙二酰輔酶 A 而生成長(zhǎng)鏈脂肪酸。FAS 普
遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中，在哺乳動(dòng)物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。
測(cè)定原理：
FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成長(zhǎng)鏈脂肪酸和 NADP+；NADPH 在
340nm有吸收峰，而 NADP+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定 340nm 光吸收下降速率，計(jì)算 FAS 活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 10mL×1 瓶，－20℃保存。用前取出置于 4℃充分解凍后混勻。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 275 μL 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分
裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 275 μL 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分
裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 525 μL 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分
裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組
織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 40min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104
個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建
議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間
隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 12000g，4℃，離心 40min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
FAS 測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑四置于 40℃水浴中預(yù)熱 30 min。
3. 測(cè)定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、20μL 試劑二、20μL 試劑
三、820μL試劑四和 40μL 試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測(cè)定吸光值，記錄第 30s 和
90s 時(shí)吸光值，分別記錄為 A1 和 A2。△A 測(cè)=A1-A2。Tel: 400-991-0197 Fax: 021-51714517 E-mail:qiyibio@163.com http://www.qiyibio.com
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FAS 活性計(jì)算公式：
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個(gè)酶活單位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109
) ÷(Cpr×V 樣)÷T
=1608×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個(gè)酶活單位。
FAS(nmol/min/g鮮重) = (△A÷ε÷d×V反總×109
) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每 104
個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個(gè)酶活單位。
FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反總×109
) ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個(gè)酶活單位。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反總×109
) ÷V 樣÷T =1608×△A
ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103
/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V 反總：反應(yīng)體系
總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V 樣：
加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。
