
您的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文獻(xiàn) > 技術(shù)交流 > 結(jié)腸稈菌感覺態(tài)細(xì)胞的制備
感覺態(tài)的細(xì)胞可以攝入外部溶液中的DNA,而常態(tài)的細(xì)胞卻不可以,所以要轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA進(jìn)入了結(jié)腸桿菌務(wù)必首先制備感覺態(tài)的結(jié)腸桿菌細(xì)胞。
1、取0.1ml過夜培育物轉(zhuǎn)種于含10ml LB營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的三角學(xué)瓶中,37℃干燥箱培育3h至OD600=0.3
2、而后再在4℃下以4000rpm離心10min,去上清液
3、在4℃下以4000rpm離心5min,去上清液真空干燥箱
4、而后把培育物倒入1.5ml離心管中,冰浴10min。
5、把菌體懸浮于15m1寒冷的0.1M CaCl2溶液中,置冰上30min
6、取1百分之百結(jié)腸桿菌E.coli接種于含2ml LB營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的玻璃管中,37℃電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱培育過夜
7、將菌體懸浮于0.1ml CaCl2溶液中,冰浴安放4-12hr備用。
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