人內(nèi)皮素-1ELISA 檢測試劑盒重慶

 本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿

試驗原理：
 ET-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知ET-1濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將ET-1和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ET-1的濃度呈比例關系。

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清－－－－-操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿－－－－-EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液－－-1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿－－－－-將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存－－－－－－如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
80 pg/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
40 pg/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
20 pg/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 pg/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 pg/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 pg/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
 標準品濃度（pg/ml） 
A 80 80 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 40 40 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 20 20 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 10 10 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 5.0 5.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 2.5 2.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結果。

試劑盒性能
 1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的ET-1標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的ET-1含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出濃度。

3、檢測值范圍：0-80pg/ml

4、敏感度： 0.1 pg/ml兔子血小板活化因子 PAFELISA試劑盒
兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白 TMELISA試劑盒
兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物 FDPELISA試劑盒
兔子纖溶酶原激活物抑制因子 PAIELISA試劑盒
兔子纖溶酶原激活物抑制因子1 PAI-1ELISA試劑盒
兔子細胞間粘附分子3 ICAM-3/CD50ELISA試劑盒
兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽 GIPELISA試劑盒
兔子細胞間粘附分子2 ICAM-2/CD102ELISA試劑盒
兔子細胞間粘附分子1 ICAM-1/CD54ELISA試劑盒
兔子透明質(zhì)酸 HAELISA試劑盒
兔子瘦素 LEPELISA試劑盒
兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4 NT-4ELISA試劑盒
兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3 NT-3ELISA試劑盒
兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶 NSEELISA試劑盒
兔子神經(jīng)生長因子 NGFELISA試劑盒
兔子脫氫表雄酮硫酸酯 DHEA-SELISA試劑盒
兔子髓磷脂堿性蛋白 MBPELISA試劑盒
 

 人內(nèi)皮素-1ELISA 檢測試劑盒重慶