抗體的提取與純化-分泌型IgA的提取

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原理

通過凝膠過濾并進(jìn)一步采用離子交換，可以純化IgA型抗體。

試劑與材料

初乳

Sephadex G200 凝膠

DEAE-52纖維素

pH7.4,0.01mol/L PB

蛋白收集儀、層析管、紫外分析儀等

操作步驟

1、100ml初乳，10000rpm離心10min，分為三層，上層黃色的是脂肪，中間層為乳清，白色的沉淀是酪蛋白。用吸管吸取中間層，裝入透析袋，濃縮蛋白至10mg/mL左右。

2、取直徑×長為2.5cm×100cm的層析柱，填裝Sephadex G200凝膠，用洗脫液平衡凝膠柱。

3、取10ml乳清液，過Sephadex G200柱，用pH7.4,0.01mol/L PBS洗脫，流速控制在0.25ml/min，第一峰（F1峰）為IgA（包含IgG）。濃縮蛋白至5mg/mL左右。

4、取直徑×長為2.5cm×25cm的層析柱，填裝DEAE-52纖維素。

5、取4ml F1峰蛋白濃縮液，過DEAE-52柱，用pH7.4,0.01mol/L PB-pH6.4,0.1mol/L PB梯度洗脫，用蛋白收集儀收集洗脫液，每管收集2ml。自動紫外比色，描繪洗脫峰曲線。第一峰為IgG，第二峰為IgA。

6、收集合并峰值洗脫溶液。濃縮后鑒定、分裝保存。