質(zhì)粒DNA醇化一
 
 
 從質(zhì)粒DNA制品中去除RNA

對(duì)于某些用場(chǎng)（例如用BAL31進(jìn)生存化或用T4噬菌體多核苷酸激酥標(biāo)記質(zhì)粒DNA的限止切斷片的5＇端）,務(wù)必取得無(wú)RNA污染的DNA制品。盡管在經(jīng)過(guò)氯化銫-溴化乙錠梯度均衡離心所制備的質(zhì)粒DNA中,這么的RNA污染物的品質(zhì)很少,但那里面的RNA分子數(shù)卻有可能相當(dāng)可觀,并可在限止酶克化反響的所有5＇端中占領(lǐng)較大的比例。經(jīng)過(guò)下述辦法,可以從質(zhì)粒制品中去除RNA。經(jīng)過(guò)Bio-Gel A-150m或Sepharose CL-4B施行層析

1、制備質(zhì)粒DNA。

2、有等大小的經(jīng)TE（pH8.0）均衡后的酚抽提1次真空干燥箱。

3、當(dāng)使聚在一起到15份時(shí),關(guān)閉柱底部,為明確質(zhì)粒DNA的散布事情狀況,可在每份使聚在一起物中取10μg樣品,經(jīng)過(guò)0.7百分之百石花膠糖凝膠電泳或溴化乙錠熒光施行剖析。

4、將DNA裝入層柱并在柱的上部連署上含0.1百分之百SDS的TE（pH8.0）的貯液瓶,迅即著手以0.5ml流出液為1流施行使聚在一起。

5、將至多1ml的水相鋪在經(jīng)TE（pH8.0）和0.1百分之百SDS均衡的Bio-Gel A-150m或Sepharase CL-4B（1x10cm）柱上。

6、將含質(zhì)粒DNA的組成合并在一塊兒,加2倍大小的酒精于4℃沉淀10min,而后以4℃大于10 000rpm離心15min,以回收DNA。