【摘要】目的建立薄層-紫外分光光度（TLC-UV）法測(cè)定天山巖黃芪根中芒柄花素的含量。方法在25℃，最大吸收波長(zhǎng)248nm處測(cè)定芒柄花素的吸收度。結(jié)果此法線性范圍1.6～9.6μg/ml內(nèi)，r=0.9996，平均回收率96.68%，RSD=2.6%（n=6）。結(jié)論用此方法可測(cè)定天山巖黃芪根中芒柄花素的含量。方法簡(jiǎn)便，靈敏和準(zhǔn)確，結(jié)果可靠。
　　
　　【關(guān)鍵詞】天山巖黃芪；芒柄花素；薄層－紫外分光光度法
　　
　　
　　豆科巖黃芪屬HedysarumLinn的植物以根入藥，具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌之功能。藥理研究證明其有強(qiáng)心、利尿、降壓、護(hù)肝、抗*炎作用［1］，已載入2005年版《中國(guó)藥典》的中藥紅芪為豆科植物多序巖黃芪的干燥根。天山巖黃芪HedysarumsemenoviiRegeletHerd與中藥紅芪屬于同科同屬植物，兩者藥理作用相近，通常作為其代用品，主要分布于新疆烏魯木齊、伊犁、阿勒泰、塔城等地區(qū)。據(jù)報(bào)道，巖黃芪屬植物富含黃酮類化合物，其中芒柄花素是天山巖黃芪根中的一種異黃酮類化合物［2］，已報(bào)道其具有雌激素樣作用，促骨細(xì)胞生長(zhǎng)作用，預(yù)防和治療腫瘤等作用，用TLC�睻V法測(cè)定天山巖黃芪根中芒柄花素的含量目前尚未見報(bào)道，筆者首次用此法對(duì)天山巖黃芪根中芒柄花素含量進(jìn)行測(cè)定。
　　
　　1儀器與試劑
　　
　　S��54型紫外光光度計(jì)（上海棱光）；微量注射器（上海高鴿工貨有限公司）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；硅膠G薄層板（青島海洋）。芒柄花素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；所用試劑均為分析純。天山巖黃芪根，采自新疆烏魯木齊哈熊溝，由北京大學(xué)藥學(xué)院天然藥物學(xué)系楊虎彪教授鑒定為天山巖黃芪。
　　
　　2方法與結(jié)果
　　
　　2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取芒柄花素對(duì)照品20mg,置于50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.4mg/ml的對(duì)照品溶液，貯存?zhèn)溆谩?br />　　
　　2.2供試品溶液的制備精密稱取天山巖黃芪根粉2.0g，置于100ml容量瓶中，加適量甲醇，超聲提取60min（溫度為50℃），過(guò)濾，殘?jiān)�用甲醇洗滌多次，與初濾液混和，在水浴鍋上濃縮至一定體積，轉(zhuǎn)至10ml容量瓶中，加甲醇定容，即得供試品溶液，貯存?zhèn)溆谩?br />　　
　　2.3芒柄花素的薄層層析展開吸取天山巖黃芪提取液與芒柄花素對(duì)照品同時(shí)點(diǎn)在薄層板上，以石油醚∶醋酸乙酯（1∶1）為展開劑展開，距前沿一定距離時(shí)取出，晾干，在紫外燈下觀察。其色譜圖見圖1。由圖1可見，天山巖黃芪中存在芒柄花素和其它化學(xué)成分。
　　
　　圖1芒柄花素的薄層色譜圖（略）
　　
　　2.4芒柄花素波長(zhǎng)的選擇精密吸取1ml芒柄花素對(duì)照品溶液置于25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以甲醇為空白溶液，在S��54紫外分光光度計(jì)上掃描吸收光譜圖，掃描波長(zhǎng)范圍200～400nm，可見芒柄花素在214，248，302nm處有吸收峰，248nm處吸收峰最大，則選擇248nm為測(cè)定波長(zhǎng)。見圖2。
　　
　　圖2芒柄花素紫外吸收光譜圖（略）
　　
　　2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密分別吸取0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml的芒柄花素對(duì)照品溶液置于25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，然后以甲醇為空白對(duì)照，置于紫外分光光度計(jì)下，在248nm處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程A=0.0788C 0.0133，相關(guān)系數(shù)r=0.9996，可知芒柄花素在1.6～9.6μg/ml間呈線性關(guān)系。
　　
　　2.6精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取芒柄花素對(duì)照品溶液（0.4mg/ml）和供試品溶液各20μl，同時(shí)點(diǎn)于一薄層板上，以石油醚∶醋酸乙酯（1∶1）為展開劑展開，距前沿一定距離時(shí)取出，晾干，在紫外燈下觀察并定位斑點(diǎn)位置，刮下對(duì)照品和與對(duì)照品相同位置的供試品斑點(diǎn)的硅膠，置于容量瓶中，加適量甲醇，超聲洗脫15min，過(guò)濾濾液至10ml的容量瓶中，用甲醇定容，于波長(zhǎng)248nm處連續(xù)測(cè)定5次吸光度，計(jì)算RSD值為0.3%。結(jié)果表明，本方法精密性較好。
　　
　　2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液10μl與對(duì)照品溶液品點(diǎn)于薄層板上，按“2.6”項(xiàng)下方法處理，于波長(zhǎng)248nm處連續(xù)測(cè)定0，0.5，1，2，3，4，5，6h范圍內(nèi)的吸光度，計(jì)算RSD值得4.2%，說(shuō)明樣品在6h內(nèi)芒柄花素的吸收度較穩(wěn)定。
　　
　　2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液10μl點(diǎn)于薄層板上，共6份，按“2.6”項(xiàng)下方法處理，于波長(zhǎng)248nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD值得3.9%，說(shuō)明樣品重復(fù)性較好。
　　
　　2.9回收率實(shí)驗(yàn)分別精密吸取芒柄花素對(duì)照品溶液5，10，20μl加到已知含量的1g樣品中。每個(gè)濃度值3份，共9份，按“2.6”項(xiàng)下方法處理，于波長(zhǎng)248nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)回收率公式計(jì)算，平均回收率96.68%，RSD=2.6%（n=6）。
　　
　　2.10樣品的含量測(cè)定用微量注射器精密吸取供試品溶液20μl與對(duì)照品同時(shí)點(diǎn)于薄層板上，共6份，按“2.6”項(xiàng)下方法處理，于248nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，結(jié)果是天山巖黃芪根中芒柄花素的百分含量為0.499%。
　　
　　3討論
　　
　　TLC-UV法測(cè)定天山巖黃芪根中的芒柄花素含量，方法簡(jiǎn)便快速，精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性均良好，可作為準(zhǔn)確含量測(cè)定用。