
您的位置:首頁 > 技術(shù)文獻(xiàn) > 漆包線 > 單克隆抗體制備1:動(dòng)物的選擇與免疫
目前進(jìn)行雜交瘤技術(shù)的研究多選用純種BALA/C小鼠。純種BALB/C小鼠較溫順,離窩的活動(dòng)范圍小,體弱,食量及排污較小,一般環(huán)境潔凈的實(shí)驗(yàn)室均能飼養(yǎng)成活。
選擇合適的免疫方案對于細(xì)胞融合雜交的成功,獲得高質(zhì)量的McAb至關(guān)重要。一般在融合前兩個(gè)月左右根據(jù)確立的免疫方案開始初次免疫,免疫方案應(yīng)根據(jù)抗原的特性進(jìn)行設(shè)定。用于免疫的抗原大致可分為兩類:可溶性抗原和顆?乖。
可溶性抗原免疫原性較弱,一般要加佐劑,半抗原應(yīng)先制備免疫原,再加佐劑。常用佐劑有福氏完全佐劑和福氏不完全佐劑。初次免疫時(shí),將1~50μg抗原加福氏完全佐劑進(jìn)行皮下多點(diǎn)注射或脾內(nèi)注射(一般0.8~1ml,0.2ml/點(diǎn))。3周后進(jìn)行第二次免疫,抗原的劑量同初次免疫,加入福氏不完全佐劑進(jìn)行皮下或腹腔內(nèi)注射,腹腔內(nèi)注射劑量不宜超過0.5ml。3周后進(jìn)行第三次免疫,劑量同初次免疫,不加佐劑,腹腔內(nèi)注射后5~7天即可采血測其效價(jià)。過2~3周后需進(jìn)行加強(qiáng)免疫,劑量以50~500μg為宜,采取腹腔內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射。3天后即可取脾融合。
目前,用于可溶性抗原(特別是一些弱抗原)的免疫方案也不斷有所更新,如:可將可溶性抗原顆粒化或固相化,一方面增強(qiáng)了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗原的使用量;蛘吒淖兛乖⑷氲耐緩,基礎(chǔ)免疫可直接采用脾內(nèi)注射。同時(shí)使用細(xì)胞因子作為佐劑,也可提高機(jī)體的免疫應(yīng)答水平,增強(qiáng)免疫細(xì)胞對抗原的反應(yīng)性。
與可溶性抗原相比,顆粒抗原免疫性強(qiáng),不加佐劑就可獲得很好的免疫效果。
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