一、目的要求
　　1．學習微生物涂片、染色的基本技術，掌握細菌的單染色方法及無菌操作技術。
　　2．鞏固顯微鏡的使用方法。
　　二、基本原理
　　所謂單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用于菌體一般形態(tài)的觀察。
　　在中性、堿性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，所以常用堿性染料進行染色。堿性染料并不是堿，和其他染料一樣是一種鹽，電離時染料離子帶正電，易與帶負電荷的細菌結合而使細菌著色。例如，美藍（亞甲藍）實際上是氯化亞甲藍鹽（methylenebluechloride，縮寫為MBC），它可被電離成正、負離子：
MBC→methylene blue++chloride-
　　帶正電荷的染料離子可使細菌細胞染成藍色。常用的堿性染料除美藍外，還有結晶紫（crystal violet）、堿性復紅（basicfu-chsin）、番紅（又稱沙黃，safranine）等。
　　細菌體積小，較透明，如未經(jīng)染色常不易識別，而經(jīng)著色后，與背景形成鮮明的對比，使易于在顯微鏡下進行觀察。
　　三、器材
　　顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，雙層瓶，擦鏡紙，生理鹽水；
　　呂氏堿性美藍染色液，石炭酸復紅染色液；
　　金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌。
　　四、操作步驟
　　1．涂片 取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央，用無菌操作（圖Ⅳ-1，具體操作參照實驗一），分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌于二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調勻并涂成薄膜。注意滴生理鹽水時不宜過多，涂片必須均勻。
　　2．干燥 于室溫中自然干燥。
　　3．固定 涂片面向上，于火焰上通過2—3次，使細胞質凝固，以固定細菌的形態(tài)，并使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細菌形態(tài)將毀壞。
　　4．染色 放標本于水平位置，滴加染色液于涂片薄膜上，染色時間長短隨不同染色液而定。呂氏堿性美藍染色液約染2—3分鐘，石炭酸復紅染色液約染1—2分鐘。
　　5．水洗 染色時間到后，用自來水沖洗，直至沖下之水無色時為止。注意沖洗水流不宜過急，過大，水由玻片上端流下，避免直接沖在涂片處。沖洗后，將標本晾干或用吹風機吹干，待完全干燥后才可置油鏡下觀察。
　　6．鏡檢
　　按實驗二操作程序進行顯微鏡觀察。