一、有限稀釋法
1、材料：
a、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板等；
b、HT培養(yǎng)基；
c、活力強(qiáng)的雜交瘤細(xì)胞；
d、小鼠腹腔細(xì)胞。
2、方法：
a、制備小鼠腹腔細(xì)胞。同“細(xì)胞融合”一節(jié)中的方法。
b、制備待克隆的雜交瘤細(xì)胞懸液，用含20%血清的HT培養(yǎng)基稀釋至每毫升含2.5、15和50個(gè)細(xì)胞三種不同的稀釋度。
c、按每毫升加入5×104-1×105細(xì)胞的比例，在上述雜交瘤細(xì)胞懸液中分別加入腹腔巨噬細(xì)胞。
d、每種雜交瘤細(xì)胞分裝96孔板一塊，每個(gè)稀釋度32孔，每孔量為0.2ml，每孔的雜交瘤細(xì)胞數(shù)分別為0.5、3和10。
e、37℃、7.5% CO2濕潤(rùn)培養(yǎng)7-10天，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的克隆即可檢測(cè)抗體；在倒置顯微鏡下觀察，標(biāo)出只有單個(gè)克隆生長(zhǎng)的孔，取上清作抗體檢測(cè)。
f、取抗體檢測(cè)陽(yáng)性孔的細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，并凍存。
g、本法中（b）、（c）、（d）也可簡(jiǎn)化為將計(jì)數(shù)后的雜交瘤細(xì)胞準(zhǔn)確地進(jìn)行系列稀釋，直至每毫升含10個(gè)細(xì)胞，按每孔接種0.1ml細(xì)胞懸液，即每孔含1個(gè)細(xì)胞。
二、軟瓊脂法
1、材料：
a、HT培養(yǎng)基（雙倍濃度）。
b、用0.15mol/L NaCl配制的2.0%瓊脂糖：稱取2.0g細(xì)胞培養(yǎng)用瓊脂糖，懸浮于100ml 0.15mol/L NaCl，121℃高壓滅菌15分鐘，分裝10ml小瓶，冷卻后4℃保存。
c、小鼠腹腔細(xì)胞。
d、滅菌平皿。
e、45℃水浴。
f、活力很好的雜交瘤細(xì)胞。
2、方法：
a、在培養(yǎng)皿中制備飼養(yǎng)細(xì)胞（小鼠腹腔細(xì)胞）單層。
b、臨用前將2.0%瓊脂糖生理鹽水溶液與等量雙倍濃度的HT培養(yǎng)液混勻，配成1%瓊脂糖培養(yǎng)液，45℃水浴中溫育。
c、吸去平皿上層培養(yǎng)液，加入1%瓊脂糖培養(yǎng)液3ml，室溫10分鐘。
d、取雜交瘤細(xì)胞懸液1ml，加入1%瓊脂糖培養(yǎng)液1ml混勻，鋪于上層。
e、37℃、7.5%濕潤(rùn)培養(yǎng)7-14天；克隆生長(zhǎng)至2mm時(shí)，用毛細(xì)吸管吸出克隆，直接轉(zhuǎn)種于含有飼養(yǎng)細(xì)胞的24孔板，擴(kuò)大培養(yǎng)。