Invitrogen核/膜系統(tǒng)
一、 實(shí)驗(yàn)原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。在GAL4系統(tǒng)中利用轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD與激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，分別與基因的ORFs融合，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達(dá)的蛋白若發(fā)生相互作用時(shí)，就會(huì)將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報(bào)告基因的表達(dá)，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。酵母雙雜交文庫的構(gòu)建是篩庫的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大規(guī)模篩選分析蛋白質(zhì)間的相互作用，是現(xiàn)在分子生物學(xué)與生物化學(xué)常用的手段。
二、實(shí)驗(yàn)步驟：
1.1 RNA提取
1.2 mRNA分離
1.3 cDNA初級文庫的構(gòu)建
1.3.1 cDNA第一鏈的合成
1.3.2 cDNA第二鏈的合成
1.3.3 cDNA adapter的制備
1.3.4 cDNA與attB1重組接頭連接(三份接頭各連一份)
1.3.5 cDNA分級分離
1.3.6 BP重組
1.3.7 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B
1.3.8 文庫克隆檢測
1.3.9 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定
1.4 cDNA次級文庫的構(gòu)建
1.4.1 初級文庫的質(zhì)粒抽提
1.4.2 LR重組
1.4.3 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B
1.4.4 文庫克隆檢測
1.4.5 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
次級文庫庫容大于107，重組率大于90%，平均插入片段大于1kb。
Invitrogen核/膜系統(tǒng)
一、 實(shí)驗(yàn)原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。在GAL4系統(tǒng)中利用轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD與激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，分別與基因的ORFs融合，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達(dá)的蛋白若發(fā)生相互作用時(shí)，就會(huì)將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一亍起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報(bào)告基因的表達(dá)，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。酵母雙雜交文庫的構(gòu)建是篩庫的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大規(guī)模篩選分析蛋白質(zhì)間的相互作用，淳風(fēng)生物科技,.淳風(fēng)生物科技|||呼和浩特酵母雙雜交文庫構(gòu)建
,西安淳風(fēng)生物科技有限公司，是現(xiàn)在分子生物學(xué)與生物化學(xué)常用的手段。
二、實(shí)驗(yàn)步驟：
1.1 RNA提取
1.2 mRNA分離
1.3 cDNA初級文庫的構(gòu)建
1.3.1 cDNA第一鏈的合成
1.3.2 cDNA第二鏈的合成
1.3.3 cDNA adapter的制備
1.3.4 cDNA與attB1重組接頭連接(三份接頭各連一份)
1.3.5 cDNA分級分離
1.3.6 BP重組
1.3.7 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B
1.3.8 文庫克隆檢測
1.3.9 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定
1.4 cDNA次級文庫的構(gòu)建
1.4.1 初級文庫的質(zhì)粒抽提
1.4.2 LR重組
1.4.3 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B
1.4.4 文庫克隆檢測
1.4.5 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
次級文庫庫容大于107，重組率大于90%，平均插入片段大于1kb。
Invitrogen核/膜系統(tǒng)
一、 實(shí)驗(yàn)原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。在GAL4系統(tǒng)中利用轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD與激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，分別與基因的ORFs融合，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達(dá)的蛋白若發(fā)生相互作用時(shí)，就會(huì)將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報(bào)告基因的表達(dá)，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。酵母雙雜交文庫的構(gòu)建是篩庫的前提，淳風(fēng)生物科技,.淳風(fēng)生物科技|||呼和浩特酵母雙雜交文庫構(gòu)建
,西安淳風(fēng)生物科技有限公司，可用于目的蛋白的互作蛋白大規(guī)模篩選分析蛋白質(zhì)間的相互作用，是現(xiàn)在分子生物學(xué)與生物化學(xué)常用的手段。
二、實(shí)驗(yàn)步驟：
1.1 RNA提取
1.2 mRNA分離
1.3 cDNA初級文庫的構(gòu)建
1.3.1 cDNA第一鏈的合成
1.3.2 cDNA第二鏈的合成
1.3.3 cDNA adapter的制備
1.3.4 cDNA與attB1重組接頭連接(三份接頭各連一份)
1.3.5 cDNA分級分離
1.3.6 BP重組
1.3.7 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B
1.3.8 文庫克隆檢測
1.3.9 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定
1.4 cDNA次級文庫的構(gòu)建
1.4.1 初級文庫的質(zhì)粒抽提
1.4.2 LR重組
1.4.3 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B
1.4.4 文庫克隆檢測
1.4.5 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
次級文庫庫容大于107，重組率大于9饣0%，平均插入片段大于1kb。
.淳風(fēng)生物科技|||呼和浩特酵母雙雜交文庫構(gòu)建
.淳風(fēng)生物科技|||石家莊雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)服務(wù)西安淳風(fēng)生物科技有限公司是由在國內(nèi)科研領(lǐng)域有著多年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)團(tuán)隊(duì)于年月組建而成、專門從事分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)為主、兼顧分子生物學(xué)相關(guān)產(chǎn)品的專業(yè)化科研公司。公司年加入中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院采購系統(tǒng)等大型政府采購平臺，同時(shí)是丁香通金牌供應(yīng)商。公司總經(jīng)理謝士勇博士畢業(yè)于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生化與分子生物學(xué)專業(yè)，讀博期間一手組建并優(yōu)化了酵母雙雜交文庫構(gòu)建及篩選，CHIP等實(shí)驗(yàn)體系，有豐富的科研實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。公司團(tuán)隊(duì)成員來源于武大，華科，華農(nóng)等國內(nèi)知名高校，在分子生物學(xué)操作方面爐火純青。我們服務(wù)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目主要有：酵母單/雙雜交文庫構(gòu)建及篩選，酵母單/雙雜交點(diǎn)對點(diǎn)，染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP），雙分子熒光互補(bǔ)（BIFC），雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)，亞細(xì)胞定位，載體構(gòu)建，基因擴(kuò)增，全基因合成，相對熒光定量，絕對熒光定量等分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)。公司成立以來，已經(jīng)與西安交通大學(xué)，陜西師范大學(xué)，西北大學(xué)，西北農(nóng)林科技，空軍軍醫(yī)大學(xué)，西京醫(yī)院，唐都醫(yī)院，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，貴州師范大學(xué)等國內(nèi)多所知名高校醫(yī)院展開了廣泛而有效的合作，專業(yè)的技能和完善的售后為我們贏得了客戶的稱贊和信賴。在不久的將來，公司希望能夠?yàn)閺V大科研工作者盡一份力，為祖國生物學(xué)產(chǎn)業(yè)的騰飛添磚加瓦！
