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哈爾濱雙熒光素酶報告基因實驗

哈爾濱雙熒光素酶報告基因實驗

  • 價 格: 3500元
  • 型號:
  • 生 產 地:中國大陸
  • 訪問:0次
  • 發(fā)布日期:2019/3/24(更新日期:2019/3/24)

西安淳風生物科技有限公司

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雙熒光素酶報告基因實驗(luciferase Assay)目前由兩個主要的應用向,第一是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用,轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子,也稱為反式作用因子
.淳風生物科技///哈爾濱雙熒光素酶報告基因實驗
  • 詳細內容
  • 公司簡介
雙熒光素酶報告基因實驗(luciferase Assay)目前由兩個主要的應用向,第一是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用,轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子,也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合,這些特異性的序列被稱為順式因子,轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現(xiàn)共價結合,從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗(luciferase Assay)是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段,
第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調控,通過生物信息學法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列,并設計合適的microRNA質;蚋深A片段,同時構建靶基因的報告基因質粒,淳風生物科技,哈爾濱雙熒光素酶報告基因實驗
,西安淳風生物科技有限公司,二者同時轉染細胞,這是確定microRNA是否能影響(上調或下調)靶基因的首選研究法。
實驗原理:
1)構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前的報告基因質粒,如pGL3-basic(轉錄因子與靶基因)或pMIR-REPORT Luciferase質粒(微小RNA與靶基因)
2) 將要檢測的轉錄因子表達質粒(或microRNA質粒)與報告基因質粒共轉染293細胞或目的細胞。如果此轉錄因子(或microRNA)能夠激活靶啟動子,則熒光素酶基因就會表達,熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。
3) 加入特定的熒光素酶底物,熒光素酶與底物反應,產生熒光素,通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性,從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。
  實驗步驟:
(1) 用生物信息學法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉錄因子結合位點。
(2) 設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒中。
(3) 篩選陽性克隆,測序,擴增克隆并提純質粒備用。
(4) 擴增轉錄因子質粒(或microRNA質粒),提純備冂用,同時準備相應的空載質粒對照。
(5) 培養(yǎng)293細胞(或其它目的細胞),并接種于6孔板中,生長24小時(80%匯合度)。
(6) 將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。
(7) 用適當?shù)姆ㄌ崛〉鞍撞⒂糜跓晒馑孛笝z測。
(8) 加入酶作用底物,于熒光計數(shù)儀上測定熒光素酶的活性。
(9) 計算相對熒光強度,并與空載對照比較,判斷影響因子是否有效的作用于靶基因。雙熒光素酶報告基因實驗(luciferase Assay)目前由兩個主要的應用向,第一是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用,轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子,也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合,這些特異性的序列被稱為順式因子,轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現(xiàn)共價結合,從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗(luciferase Assay)是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段,
第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調控,通過生物信息學法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列,并設計合適的microRNA質;蚋深A片段,同時構建靶基因的報告基因質粒,二者同時轉染細胞,這是確定microRNA是否能影響(上調或下調)靶基因的首選研究法。
實驗原理:
1)構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前的報告基因質粒,如pGL3-basic(轉錄因子與靶基因)或pMIR-REPORT Luciferase質粒(微小RNA與靶基因)
2) 將要檢測的轉錄因子表達質粒(或microRNA質粒)與報告基因質粒共轉染293細胞或目的細胞。如果此轉錄因子(或microRNA)能夠激活靶啟動子,則熒光素酶基因就會表丬達,熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。
3) 加入特定的熒光素酶底物,淳風生物科技,哈爾濱雙熒光素酶報告基因實驗
,西安淳風生物科技有限公司,熒光素酶與底物反應,產生熒光素,通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性,從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。
  實驗步驟:
(1) 用生物信息學法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉錄因子結合位點。
(2) 設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒中。
(3) 篩選陽性克隆,測序,擴增克隆并提純質粒備用。
(4) 擴增轉錄因子質粒(或microRNA質粒),提純備用,同時準備相應的空載質粒對照。
(5) 培養(yǎng)293細胞(或其它目的細胞),并接種于6孔板中,生長24小時(80%匯合度)。
(6) 將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。
(7) 用適當?shù)姆ㄌ崛〉鞍撞⒂糜跓晒馑孛笝z測。
(8) 加入酶作用底物,于熒光計數(shù)儀上測定熒光素酶的活性。
(9) 計算相對熒光強度,并與空載對照比較,判斷影響因子是否有效的作用于靶基因。雙熒光素酶報告基因實驗(luciferase Assay)目前由兩個主要的應用向,第一是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用,轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子,也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合,這些特異性的序列被稱為順式因子,轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現(xiàn)共價結合,從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗(luciferase Assay)是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段,
第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調控,通過生物信息學法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列,并設計合適的microRNA質;蚋深A片段,同時構建靶基因的報告基因質粒,二者同時轉染細胞,這是確定microRNA是否能影響(上調或下調)靶基因的首選研究法。
實驗原理:
1)構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前的報告基因質粒,如pGL3-basic(轉錄因子與靶基因)或pMIR-REPORT Luciferase質粒(微小RNA與靶基因)
2) 將要檢測的轉錄因子表達質粒(或microRNA質粒)與報告基因質粒共轉染293細胞或目的細胞。如果此轉錄因子(或microRNA)能夠激活靶啟動子,則熒光素酶基因就會表達,熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。
3) 加入特定的熒光素酶底物,熒光素酶與底物反應,產生熒光素,通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性,從而判斷轉錄因子是否



.淳風生物科技///哈爾濱雙熒光素酶報告基因實驗

.淳風生物科技|||石家莊雙熒光素酶報告基因技術服務西安淳風生物科技有限公司是由在國內科研領域有著多年從業(yè)經驗的專業(yè)團隊于年月組建而成、專門從事分子生物學技術服務為主、兼顧分子生物學相關產品的專業(yè)化科研公司。公司年加入中國農業(yè)科學院采購系統(tǒng)等大型政府采購平臺,同時是丁香通金牌供應商。公司總經理謝士勇博士畢業(yè)于華中農業(yè)大學生化與分子生物學專業(yè),讀博期間一手組建并優(yōu)化了酵母雙雜交文庫構建及篩選,CHIP等實驗體系,有豐富的科研實踐經驗。公司團隊成員來源于武大,華科,華農等國內知名高校,在分子生物學操作方面爐火純青。我們服務的實驗項目主要有:酵母單/雙雜交文庫構建及篩選,酵母單/雙雜交點對點,染色質免疫共沉淀(ChIP),雙分子熒光互補(BIFC),雙熒光素酶報告基因實驗,亞細胞定位,載體構建,基因擴增,全基因合成,相對熒光定量,絕對熒光定量等分子生物學技術服務。公司成立以來,已經與西安交通大學,陜西師范大學,西北大學,西北農林科技,空軍軍醫(yī)大學,西京醫(yī)院,唐都醫(yī)院,華中農業(yè)大學,貴州師范大學等國內多所知名高校醫(yī)院展開了廣泛而有效的合作,專業(yè)的技能和完善的售后為我們贏得了客戶的稱贊和信賴。在不久的將來,公司希望能夠為廣大科研工作者盡一份力,為祖國生物學產業(yè)的騰飛添磚加瓦!
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