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血漿凝血酶調(diào)節(jié)蛋白抗原檢測(cè)

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上傳時(shí)間：2015/4/22 10:24:48

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上 傳 者：恒遠(yuǎn)免疫學(xué)第三方檢測(cè)中心

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 血漿凝血酶調(diào)節(jié)蛋白抗原檢測(cè)
 
實(shí)驗(yàn)原理
 
以抗人血栓調(diào)節(jié)蛋白單克隆抗體（或抗血清）包被聚苯乙烯放免小杯，樣品中的TM結(jié)合于包被的放免小杯上，加入125I-抗人TM單抗，根據(jù)結(jié)合的125I-放射性強(qiáng)度計(jì)算出樣品中TM含量。
 
 
 
主要試劑與器材
 
1、抗人TM單克隆（或多克�。┛贵w包被液：將抗人TM單抗用0.1mol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.5）稀釋至10μg/ml。
 
2、緩沖液A：0.05mol/L Tris-HCI，0.15mol/L NaCl，2.5mol/LCaCl2，肝素20U/ml，pH7.4。
 
3、緩沖液B：0.05mol/L Tris-HCI，0.15mol/L NaCl，2.5mol/LCaCl2，5mg/mL BSA，pH7.4。
 
4、人TM標(biāo)準(zhǔn)液：取人TM標(biāo)準(zhǔn)品用緩沖液A稀釋至500ng/mL。
 
5、125I-抗人TM單抗：取125I-抗人TM單抗用緩沖液B稀釋至終濃度105cpm/0.2ml。
 
6、洗滌液A：0.05mol/L Tris-HCI，0.15mol/L NaCl，2.5mol/LCaCl2，pH7.4。
 
7、洗滌液B：洗滌液A含0.05% Tween 20。
 
 
 
操作步驟
 
1、樣品采集：全血9份2%EDTA-Na2 1份（或3.8%枸櫞酸鈉1份）抗凝，1500rpm離心10min，以分離血漿。血管內(nèi)皮細(xì)胞樣品，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液或細(xì)胞溶解物上清液。尿液檢測(cè)取24h尿或早晨次尿液。
 
2、將200μl抗人TM單抗包被液加入聚苯乙烯放免小杯，4℃過夜，用洗滌液A洗3次。將待測(cè)樣品（或TM標(biāo)準(zhǔn)液）0.25ml與等量緩沖液A混合，每小杯加入200μl稀釋樣品液（空白管加入200μl緩沖液A），37℃水浴2h，用洗滌液A洗3次，加入200μl125I-抗人TM單抗，37℃水浴2h，再用洗滌液B洗6次，γ計(jì)算儀測(cè)放射活性。
 
3、結(jié)果結(jié)算：1.以正常人混合血漿（或尿液）TM含量為100%，計(jì)算待測(cè)樣品TM：Ag百分率。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：人TM標(biāo)準(zhǔn)品用緩沖液A作倍比稀釋，TM濃度分別為500ng/mL、250ng/mL、125ng/mL、62.5ng/mL、31.25ng/mL、15.6ng/mL、7.8ng/mL、3.9ng/mL、和0ng/mL，然后同上述方法測(cè)TM含量，以人TM濃度為橫坐標(biāo)，以每分鐘的放射性脈沖數(shù)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，或計(jì)算出直線回歸方程。

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